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8% SDS-PAGE分离胶制备试剂盒

价格：￥1180

品牌：佰利莱

产地：上海

最新更新日期：2022-09-09 04:16

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上海佰利莱生物科技有限公司

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公司：上海佰利莱生物科技有限公司

联系人：付经理

产品属性

产品说明

品牌：佰利莱
产品规格：50T
准备物品：
清理液（A）毫升
染色液（t B）微升
稀释液（C）毫升
溶解液（tD）毫升
产品说明书 1份

注意事项：
1．基础程序。
2．扩增温度和延伸温度。
3．反应时间。
4．循环次数。
5．片PCR 反应液的配制。
6．PCR技术的基本原理。
7．PCR的反应动力学。
8．PCR扩增产物。
9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。