- 960化工网
- 上海名劲生物科技有限公司
- 大鼠心脏微血管内皮细胞/大鼠心脏微血管内皮细胞/大鼠心脏微血管内皮细胞
￥1
Mcellbank
国内
2022-09-14 14:03
我要认领上海名劲生物科技有限公司
张丽
sh@mjswkj.cn
产品属性
产品说明
大鼠心脏微血管内皮细胞/大鼠心脏微血管内皮细胞/大鼠心脏微血管内皮细胞
实验目的和要求：掌握无菌操作技术。了解小鼠解剖操作技术。了解原代细胞培养的一般方法与步骤了解培养细胞的消化分散。了解细胞计数方法。了解倒置显微镜的使用。实验原理：原代细胞培养是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老，死亡等生命现象。实验内容：动物的选择：选择大约一半足孕时间的胚胎，10－13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。每组小鼠胚胎1个实验材料：每组的超净台中有以下物品：1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶2. 100ml灭菌烧杯2个；3、50ml离心筒2个4、灭菌培养皿1个， 细胞培养 瓶1个4、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个5、细胞计数板1块；6、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；7、酒精灯1台；试验操作步骤：1)胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠)a．采用认可的方案处死啮齿动物。b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。2)将1－2个胚胎转移至一个小的无菌培养皿中，用新的无菌剪刀小心地绞碎胚胎， 用PBS漂洗。3)在无菌状态下，将绞碎的胚胎转移于一50ml 的无菌离心筒中, 加入40ml 0.25％的无菌胰蛋白酶,用搅拌棒轻轻搅动 。4)在温暖的环境中或置于37 °C培养箱中轻轻摇动15分钟。5)让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中，该管内按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以灭活,胰蛋白酶。6)加人新鲜胰蛋白酶溶液(见前述步骤)于含有残留未消化组织块的原来的50ml离心筒中，重复步骤4和5。7)离心混合的细胞悬液，1200r/rain，5分钟，弃上清。8)用新鲜的无菌PBS重悬沉淀的细胞，按步骤7再次离心。9)用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止。大鼠心脏微血管内皮细胞/大鼠心脏微血管内皮细胞/大鼠心脏微血管内皮细胞
一、组织块直接培养法1、取材，用Hank's液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。2、用手术剪将组织剪切成1mm3 左右的小块，再用Hank's液洗三次。3、将组织块转移至培养瓶，并贴附于瓶底面。4、轻轻将培养瓶翻转，瓶底朝上，向瓶内注入适量的培养液，将培养瓶放置在37℃恒温箱内培养。5、放置待组织小块贴附后，将培养瓶慢慢翻转平放，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。二、消化培养法1、取材，用Hank's液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。2、用手术剪将组织剪切成1mm3 左右的小块，再用Hank's液洗三次。3、视组织块量加入酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。4、加入3—5ml培养液以终止酶消化作用（或加入相关酶抑制剂）。5、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。6、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。7、加入Hank's液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。8、加入培养液1—2ml（视细胞量），血球计数板计数。9、将细胞转移到培养瓶中，37℃下培养。
大鼠心脏微血管内皮细胞/大鼠心脏微血管内皮细胞/大鼠心脏微血管内皮细胞三、器官培养1、将不锈网做成支架形状，调整其高度至培养皿的1/2深度平面，在其表面放置0.5μm孔径滤膜。2、将培养液加入培养皿中，使液面刚刚接触到滤膜，但不要使其浮起。3、将要培养器官组织放在滤膜上，一般厚度不要超过200μm，水平面积不超过10mm2 。4、将上述准备好的培养物放入CO2 培养箱，并加注氧气调整氧分压，最好到90%。5、培养过程中要注意观察培养液平面，尽可能保持在与滤膜一致的水平上。6、上述可进行器官培养1-3周，每2-3天换液一次，并根据情况做进一步实验和检测。
