黄曲霉毒素 M1 快速检测试剂盒说明书价格,详情介绍-960化工网

黄曲霉毒素 M1 快速检测试剂盒说明书

价格：¥1800

品牌：YOYOBIO

最新更新日期：2022-09-15 07:09

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上海研谨生物科技有限公司

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产品属性

产品说明

2014-01 版

黄曲霉毒素M1快速检测试剂盒说明书

一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物黄曲霉毒素M1

将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争黄曲霉毒素M1 抗体，加入酶标记物后，用 TMB 底物显色，样本吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物黄曲霉毒素M1的含量。

二、试剂盒特性

试剂盒灵敏度：0.03ppb

u孵育温度：25℃

u孵育时间：30min～15min

样本检测下限

牛奶······································0.3 ppb

奶粉······································0.12ppb

交叉反应率

黄曲霉毒素M1 ···································· 100%

样本回收率

牛	奶	··································		90±25%
奶	粉	··································		85±25%
三、试剂盒组成

1	微量测试孔		每条 8 孔，一板 12 条

	标准液×6 瓶		0ppb	0.03ppb
2	标准液×6 瓶		0.06ppb	0.12ppb
2	（1ml/瓶）		0.06ppb	0.12ppb
	（1ml/瓶）		0.24ppb	0.48ppb
			0.24ppb	0.48ppb

3	酶标记物		7ml	红色帽

4	抗体工作液		7ml	蓝色帽

5	底物 A 液		7ml	白色帽

6	底物 B 液	7ml	黑色帽

7	终止液	7ml	黄色帽

8	20X 浓缩洗涤液	40ml	白色帽

9	2X 浓缩复溶液	50ml	透明帽

四、所用仪器、试剂

具备的仪器：酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹仪、恒温箱、打印机

微量移液器：单道20～200µl、单道100～1000µl、

多道30～300 µl

试剂：乙晴、乙酸乙酯

五、样本前处理步骤

样本处理前须知

（a）实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

样本前处理需配制：配液1样本复溶液：

用去离子水将2×浓缩复溶液按1：1稀释。

配液2样本提取液：

将乙晴与乙酸乙酯按1:2比例混合均匀（1份乙晴+2份乙酸乙酯）。

样本处理：

（a）牛奶样本处理方法（适用于乳饮料）：

1、取牛奶样本 100µl，加入 900µl 去离子水，充分振荡混匀；2、取 50µl 用于分析。

样本稀释倍数: 10倍

（b）奶粉样本处理方法：

1、取 1.0±0.05g *奶粉样本于 50ml 离心管中；加入3ml 去离子水，再加入 8ml 样本提取液，充分振荡3min，20℃4000r/min以上离心10min；2、移取 2ml 上层清澈液到另一离心管中，50-60℃氮气流下干燥；3、用 1ml 正己烷溶解干燥的残留物，再加入 1ml样本复溶液充分混合30s；20℃4000r/min以上离心10min；去除上层正己烷相；

4、取 50µl 用于分析。

样本稀释倍数：4倍

六、酶标免疫分析程序:

测定前应须知：

1、使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、使用之后立即将所有试剂放回 2～8℃。

3、在 ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。

操作步骤：

1、从 2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

3、配液：将 40ml 浓缩洗涤液（20 倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。

4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、加标准品/样本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，25℃环境
反应30min。

6、将孔内液体甩干，用稀释后的洗涤液 250µl/孔洗板4～5次，每次间隔15～30秒，用吸水纸拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

7、显色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B 液50µl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显
色15min。

8、测定：加入终止液 50µl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm 检测，5min 内读数），测定每孔 OD 值。

七、结果判定

结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素M1量成负相关。
1、粗略判定：

用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.3，样本2的吸光度值为1.0，标准液吸光度值分别是：

0ppb 为 2.243；0.03ppb 为 1.816；0.06ppb 为 1.415； 0.12ppb 为 0.74；0.24ppb 为 0.313；0.48ppb 为 0.155。则样本1的浓度范围是0.24ppb～0.48ppb；样本2

的浓度范围是0.06ppb～0.12ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素M1实际浓度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即

B
百分吸光率（%）＝×100%
B₀

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml 标准溶液的平均吸光度值（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素

M1 标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素M1实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）

八、注意事项

1、室温低于 25℃或试剂及标本未回到室温（20～25℃）会导致所有标准的 OD 值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。

4、反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。

5、不要使用过了有效日期的试剂盒；稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值变化；不要交换使用不同批号的盒中试剂。

6、不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

7、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。标准品1的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能变质。

8、该试剂盒最佳反应温度为 25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期

1、储藏条件：试剂盒于 2～8℃保存，不要冷冻。

2、保质期：该产品有效期为 1 年，生产日期见包装盒。

提示：酶标板真空包装袋若有漏气，酶标板仍然正常有效，不影响实验结果，请放心使用。

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