产品概述： 本品催化相邻DNA链的5'-P末端和3'-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需ATP作辅酶。本品不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接，也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。产品规格：350U/μl
单位定义：在20μl的连接反应体系中，6μg的λDNA-HindⅢ的分解物在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位。
贮存条件：10mM Tris-HCl(pH7.0，25℃)，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA和50%glycerol缓冲液中。-20℃保存一年以上。
反应缓冲液：10× T4 DNA Ligase Buffer:300mM Tris-HCl(pH7.8, 25℃)，100mM MgCl2 ，100mM DTT，10mM ATP。
质量控制：使用SDS-PAGE分析纯度>95%，无核酸内切酶，外切酶。每批产品均通过模拟克隆实验进行检测，该实验可以检测出待连接DNA末端的任何破坏。结果表明>99.9%的DNA末端未受任何降解。
使用方法:
DNA片段和载体DNA的连接
1)在无菌微量离心管中制备下列连接反应液:
DNA片段 | 0.3pmol |
载体DNA | 0.03pmol |
T4 DNA Ligase | 1μl |
10×T4 DNA Ligase Buffer | 2.5μl |
补超纯水至25μl，充分混匀后短暂离心。
注意：
DNA 片段的摩尔数应控制在载体 DNA 摩尔数的 3～10倍。
平末端的载体与 DNA 片段进行连接时，应将载体进行去磷酸化处理，以防止自身环化。
2）16℃过夜反应。
说明:
l 平滑末端的连接反应较粘末端连接反应较慢，进行平滑末端连接反应时，可提高DNA片段的浓度，同时将本酶的用量提高到粘末端使用量的2-5倍。
l本酶的最适温度为37℃，由于热稳定性较差，因此长时间反应时通常在16℃进行，若反应2h左右可以室温进行。
lEDTA的存在会阻碍连接反应的进行，因此制备DNA片段时需用灭菌蒸馏水或TE缓冲液溶解。
l10×反应缓冲液中的 DTT经冷冻后可能形成沉淀。如果出现沉淀，将缓冲液震荡混合直到沉淀溶解。沉淀溶解后，本产品的性能不受影响。
0.012元/U，包装为100万单位。咨询电话：13699257256 冯先生
