细胞名称MHCC97-L（人低转移肝癌细胞）

  种属人

  年龄（性别）

  组织来源

  生长特性贴壁

  细胞形态

  上皮细胞样

  背景描述

  生长培养基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

  培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

  细胞处理：

  1）冻存细胞的复苏：

  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

  对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

  悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

  3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

  下面T25瓶为例；

  1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

  2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

  3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

  细胞售后服务

  一、收到细胞处理方法

  1、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100x，200x各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。

  2、收到细胞未开封，出现污染状况我单位负责免费重发一次细胞。

  3、收到细胞后，可将培养瓶里多余的培养基收集放置于4℃备用。刚开始培养时，建议用瓶内的培养基，可补加2%血清，待细胞状态恢复后，培养液一半用瓶内的，一半用用户自备的，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。

  二、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

  1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

  2、细胞污染问题，请在收到产品24小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

  3、常温发货的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

  4、干冰冻存发货的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

  5、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；

  6、细胞活性问题，请在收到产品7天内给我单位提出真实的实验结果（用台盼蓝染色法鉴定细胞活力），核实后予重发；

  7、视具体情况而定。

  三、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

  1、用户操作造成细胞污染，不重发；

  2、用户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；

  3、非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

  4、细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发；

  5、细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；

  6、细胞收到2天内，未告知的，不重发；

  7、视具体情况而定。

  四、其他服务政策（仅限细胞系）

  1、细胞出现问题后，未能及时反馈的，不能免费重发，如需重发，用户需重新支付的费用，具体视情况而订。

  2、如客户收到细胞8-30天之内，因处理不当造成细胞死亡或污染，用户需重新支付的费用，具体视情况而订。