细胞名称SW1116（人结肠腺癌细胞）

  种属人

  年龄（性别）男；73岁

  组织来源结肠腺癌Ⅲ期

  生长特性贴壁

  细胞形态上皮细胞样

  背景描述SW1116细胞CSAp阴性(CSAp-)、结肠抗原3阴性；SW1116细胞角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。癌基因检测表明，SW1116细胞c-myc、K-ras、H-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性，未检测到癌基因N-myc和N-ras的表达。SW1116还表达肿瘤特异的核基质蛋白CC-4、CC-5和CC-6。

  生长培养基DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S

  培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

  T25瓶细胞处理方法

  收到人结肠腺癌细胞SW1116后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题，请即时联系。并进行以下操作：

  1.75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

  2.将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

  3.预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

  4.显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）。

  5.①若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上，进行传代。

  ②若细胞密度较大，达到80%以上，将细胞传代培养。

  购买细胞处理方法和注意事项

  *客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项及细胞使用说明书，确保细胞的培养条件一致及售后服务判定标准。

  我们公司贴壁细胞的常规运输方式是将细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满新鲜的完全培养液并封好瓶口进行运输。冬季温度比较低的情况下，我们会根据收货人所在省份的平均温度高低和距离采取对细胞不同状态下发货，包括活细胞瓶装发货、活细胞胰酶消化离心后血清发货、冻存管发货。客户收到细胞后请严格按照以下要求进行操作。

  1.客户在收到瓶装细胞后，先观察培养瓶是否完好，培养液是否外渗，培养液是否混浊，若出现破裂、渗液、培养液混浊等问题，请在收到细胞后的当天与我们的销售或技术支持联系，我们会及时处理(联系方式详见页脚)。

  2.细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满新鲜的完全培养液(内含细胞培养的血清含量和双抗)，封好瓶口是我们正常运输细胞的方法。细胞出库前都是处于无菌状态，并且生长良好，我们也会对出库细胞进行拍照留档。（建议客户在收到我们的细胞时将培养液拍张照片，观察培养液的颜色以及是否漏液，观察细胞时请拍100X、200X各2-3张照片进行留存，方便后期细胞状态的对比，拍摄的照片应当清晰。）

  3.客户在收到贴壁瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用75%酒精擦拭干净，镜检细胞贴壁情况。若贴壁良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2H后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，再将多余培养液抽出进行继续培养，或直接进行

  细胞传代(消化、传代步骤详见细胞使用说明书)；若贴壁细胞有部分细胞悬浮，请先将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2H后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，将培养液抽出，依次离心(1000rmp 5min)将悬浮细胞收集后放回原瓶进行过夜培养，并次日观察贴壁情况。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色鉴定细胞活力，证实细胞无活力，请将细胞拍照(多倍数多视野)及染色照片发送至技术支持的邮箱，我们会尽快处理。(以上仅为贴壁细胞处理方法)。

  4.客户在收到悬浮瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用酒精擦拭干净，镜检细胞状态。若状态良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2H后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，将整瓶细胞悬液分别离心(1000rmp 5min)后收集于离心管中，视其离心后的细胞量进行放回培养或分瓶培养。(以上仅为悬浮细胞处理方法)。

  5.客户在收到半悬浮瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用酒精擦拭干净，镜检细胞状态。若状态良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2H后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，将整瓶细胞悬液中的上层悬浮细胞离心(1000rmp 5min)

  后收集于离心管中，重悬细胞后放回原瓶与贴壁细胞共同培养至传代。重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营养条件，防止贴壁细胞缺乏营养。(以上仅为半悬浮细胞处理方法)。

  6.若客户收到1.8ml离心管常温细胞，收到细胞后观察是否管裂、漏液、污染，若有以上任何一种现象，请立即拍照后联系我们。若无以上现象，请用75%酒精对离心管进行消毒后放到操作台内，严格无菌操作，过火打开管盖，将管中的血清细胞轻轻吹

  打几下，取出后放入15ml离心管中，加入双倍或3倍的完全培养液1000rmp/5min离心，弃上清重悬后与对应的完全培养液混匀，加入到培养瓶中过夜培养，第二天观察细胞状态和密度。若密度未达85%则继续培养，若达85%以上则可直接进行传代。

  收到细胞过夜培养24h后发现细胞污染或者状态不佳，必须在发现问题的当天即刻向我们销售人员反馈。(以上仅为血清运输细胞处理方法)。

  7.若客户收到冻存管细胞，请尽快复苏。复苏方法：1、37°水浴晃动直至融化（不要超过一分钟），移至15ml离心管，另加入3-5倍完全培养液，1000rmp

  5min，弃上清，放入25cm2瓶中培养，第二天拍照留存有效信息。2、37°水浴晃动直至融化（不要超过一分钟），直接放进加有6-8ml培养基的25cm2瓶中培养，16小时之后必须换液并拍照留存有效信息。

  8.传代注意事项

  胰酶消化的过程至关重要。消化过度细胞会粘连拉丝，严重影响细胞活性和后期状态；消化不完全则细胞难以从瓶壁自行脱落，反复对细胞表面进行吹打会损伤细胞活性，导致细胞后期状态差、增值能力低下以及细胞形态发生改变。影响消化的因素有很多，主

  要包括胰酶溶液的活性（配置条件、低温保存时间长短、是否反复冻融，解冻后的存放时间及温度等）、消化细胞时的温度（建议在37°培养箱中消化）、胰酶所加的量（以T25为例，一个T25加1ml胰酶）、细胞的密度（同株细胞不同密度下胰酶对细胞的消化时间也不同，密度稀消化时间快，密度大消化时间相对较慢）等。不同细胞对胰酶的敏感性也不同，对于新购买的细胞，建议客

  户用含0.25EDTA的胰酶消化液先培养箱持续消化1-2min，镜下观察细胞是否变圆，直至细胞完全脱落或者轻拍瓶壁完全脱落。记录*佳消化时间，下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。