细胞名称GNM（人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞）

  种属：人

  年龄（性别）

  生长特性：细胞形态

  培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

  GNM人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞不同前景的细胞：

  ①增殖细胞：这种细胞能及时从G1期进入S期，并保持旺盛的分裂能力。例如消化道上皮细胞及骨髓细胞等

  ②暂不增殖细胞或休止细胞：进入G1期后不立即转入S期，在需要时，如损伤、手术等，才进入S期继续增殖。例如肝细胞及肾小管上皮细胞等

  ③不增殖细胞：此种细胞进入G1期后，失去分裂能力，终身处于G1期，最后通过分化、衰老直至死亡。例如高度分化的神经细胞、肌细胞及成熟的红细胞等。

  常规培养传代流程：（请严格遵照无菌操作）

  1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）

  2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，层吹落，吹散

  3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

  4、注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

  GNM（人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞）保种心得：

  首先，细胞采购的运输形式一般分为两种，一种是直接寄送冻存细胞，一种是复苏后寄送活细胞。前者是由液氮中取出细胞冻存管，采用干冰运输；后者是将细胞复苏至T-25培养瓶中，采用常温运输。两者各有优缺点，第一种方式的优点是可以长途运输，因为细胞在干冰中相对稳定，一般可以保证数周之内不影响细胞活性，但缺点是运输成本高，且细胞复苏是很复杂的过程，如果细胞复苏后状态不佳，则很难界定是来源的问题还是复苏操作的问题；而第二种方式的优点是细胞收到后可以直接通过观察来大体了解细胞状态，并且对运输的要求相对较低，缺点则是只适合短途运输，因为即便运输时培养基中不添加血清，细胞还是会不断增殖，当细胞长满后，细胞的状态会随时间的增加而不断变差。综上，如果是从国外大型细胞库采购，一般采用第一种方法，既能适应长途运输，且大型细胞库的冻存细胞质量普遍较好，在良好的操作下复苏成活率很高；如果是从国内细胞库采购，则一般采用第二种方法，方便收到细胞时能较好掌握细胞状态，并且降低运输成本。

  GNM（人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌细胞）分别针对两种运输方式来谈下对新细胞的处理过程：

  对于直接寄送冻存细胞的情况，首先要检查的就是细胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已经没有干冰，则细胞状态可能会收到影响，建议尽快复苏；如果有足量干冰，建议先转移至-80℃冰箱过夜，于第二天按正常流程复苏，即37℃水浴锅中快速融解，低速离心后去除含DMSO的冻存液，换入适合细胞的新鲜培养基，轻柔吹匀后转移至培养皿中，补足培养基；一般贴壁细胞在24h内即可观察到细胞贴壁，从而判断细胞状态，悬浮细胞则复苏后即可观察细胞状态。对于冻存时间较长的细胞，可能需要传代1到2次后，细胞才会调整到正常状态，所以细胞复苏后如果状态不佳，不要灰心，仍要细心培养。

  对于复苏后寄送活细胞的情况，则细胞收到后要先检查细胞瓶是否有破损，细胞瓶在运输中很有可能受到碰撞和挤压，导致瓶体受损。如果发现细胞瓶受损，则需要尽快处理，该弃就弃。如果细胞瓶完好，则用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培养箱中静置1-2h。待细胞稳定后，观察细胞状态，并及时记录，因为很多国内细胞库都是可以反馈细胞状态的，如果收到时细胞状态不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。细胞如没有异常，则尽快传代并更换适合细胞的新鲜培养基。由于新细胞一般都是第一次接触，细胞传代过程中尤为需要注意胰酶消化时间，消化时间过短或过长都会影响细胞状态，甚至导致细胞死亡。我建议大家采用低浓度胰酶消化，消化时缩短放培养箱和观察的间隔时间，以便尽可能找到合适的消化时间。