实验方法

1．用6孔板培养细胞，待细胞生长达到60%-70%，吸出旧培养基，根据实验需求处理，继续培养。
2．根据实验处理时间，把细胞培养液吸出至一合适离心管内，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量胰酶细胞消化液消化细胞。室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。（注意：悬浮细胞不需要胰酶消化，直接收集到离心管即可）
3．加入步骤(2)中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000g离心5min，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。（注意：加入步骤2）中的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶；残留的胰酶会消化并降解后续加入的Annexin V-FITC导致染色失败。
4．取5-10万重悬的细胞，200g离心5 min，弃上清，加入195 μl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。
5．加入5 μl Annexin V-FITC，轻轻混匀。
6．室温(20-25℃)避光孵育10 min。可以使用铝箔进行避光。
7．200g离心5 min，弃上清，加入190 μl Annexin V-FITC结合液重悬细胞。
8．加入10 μl碘化丙啶染色液，轻轻混匀，冰浴避光放置。
9．进行流式细胞仪检测，Annexin V-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光。

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18、免疫组化实验：http://www.biornscience.com/News_read_id_190.shtml

19、流式细胞术检测细胞亚型：http://www.biornscience.com/News_read_id_184.shtml

20、流式细胞术检测巨噬细胞极化：http://www.biornscience.com/News_read_id_183.shtml

21、活性氧ROS检测：http://www.biornscience.com/News_read_id_182.shtml

22、自噬相关实验及自噬流检测：http://www.biornscience.com/News_read_id_179.shtml

23、小管形成实验：http://www.biornscience.com/News_read_id_178.shtml

24、EdU细胞增殖实验：http://www.biornscience.com/News_read_id_177.shtml

25、TUNEL凋亡染色：http://www.biornscience.com/News_read_id_175.shtml

26、免疫共沉淀实验（coip）：http://www.biornscience.com/News_read_id_154.shtml

27、流式细胞术检测细胞周期：http://www.biornscience.com/News_read_id_146.shtml

28、流式细胞术检测细胞凋亡：http://www.biornscience.com/News_read_id_145.shtml

29、各类病理切片染色：http://www.biornscience.com/News_read_id_143.shtml

30、克隆形成实验：http://www.biornscience.com/News_read_id_134.shtml

31、蛋白泛素化检测：http://www.biornscience.com/News_read_id_141.shtml

32、蛋白乙酰化检测：http://www.biornscience.com/News_read_id_180.shtml

33、流式细胞术检测小胶质细胞极化：http://www.biornscience.com/News_read_id_148.shtml

34、流式细胞术检测T细胞极化：http://www.biornscience.com/News_read_id_147.shtml

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36、细胞焦亡相关实验：http://www.biornscience.com/News_read_id_140.shtml

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41、扫描电镜、透射电镜实验：http://www.biornscience.com/News_read_id_196.shtml

42、mTOR通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_162.shtml

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44、HIF-1通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_159.shtml

45、Hedgehog通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_157.shtml

46、炎症小体相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_160.shtml

47、凋亡通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_156.shtml

48、Hippo通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_158.shtml

49、EGFR通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_155.shtml

50、NF-κB通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_163.shtml

51、wnt/β-catenin通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_168.shtml

52、PI3K-AKT通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_169.shtml

53、JNK通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_171.shtml

54、TGFβ-SMAD通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_172.shtml

55、自噬通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_173.shtml

56、ERK通路相关研究：http://www.biornscience.com/News_read_id_205.shtml