基因芯片(genechip)(又称DNA芯片、
生物芯片)的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是
杂交测序方法,即通过与一组已知序列的
核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法,在一块基片表面固定了序列已知的靶
核苷酸的探针。当溶液中带有
荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时,通过确定荧光强度最强的探针位置,获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。
基本步骤生物芯片是将生命科学研究中所涉及的不连续的分析过程(如样品制备、
化学反应和分析检测),利用微电子、微机械、化学、物理技术、计算机技术在固体芯片表面构建的微流体分析单元和系统,使之连续化、集成化、微型化。
生物芯片技术主要包括四个基本要点:芯片方阵的构建、样品的制备、生物分子反应和信号的检测。1、芯片制备,先将玻璃片或硅片进行表面处理,然后使DNA片段或蛋白质分子按顺序排列在芯片上。2、样品制备,生物样品往往是非常复杂的生物
分子混合体,除少数特殊样品外,一般不能直接与芯片反应。可将样品进行
生物处理,获取其中的蛋白质或DNA、RNA,并且加以标记,以提高检测的灵敏度。3、生物分子反应,芯片上的生物分子之间的反应是芯片检测的关键一步。通过选择合适的反应条件使生物分子间反应处于最佳状况中,减少生物分子之间的
错配比率。4、芯片
信号检测,常用的芯片信号检测方法是将芯片置入芯片扫描仪中,通过扫描以获得有关
生物信息。
1、芯片制备
目前制备芯片主要以玻璃片或硅片为
载体,采用
原位合成和微
矩阵的方法将寡核苷酸片段或cDNA作为探针按顺序排列在载体上。芯片的制备除了用到微加工工艺外,还需要使用机器人技术。以便能快速、准确地将探针放置到芯片上的指定位置。
2、样品制备
生物样品往往是复杂的生物分子混合体,除少数特殊样品外,一般不能直接与芯片反应,有时样品的量很小。所以,必须将样品进行提取、扩增,获取其中的蛋白质或DNA、RNA,然后用荧光标记,以提高检测的灵敏度和使用者的安全性。
3、
杂交反应
杂交反应是荧光标记的样品与芯片上的探针进行的反应产生一系列信息的过程。选择合适的反应条件能使生物分子间反应处于最佳状况中,减少生物分子之间的错配率。
4、信号检测和结果分析
杂交反应后的芯片上各个反应点的荧光位置、荧光强弱经过芯片扫描仪和相关软件可以分析图像,将荧光转换成数据,即可以获得有关生物信息。 基因芯片技术发展的最终目标是将从样品制备、
杂交反应到信号检测的整个分析过程集成化以获得微型全分析系统(micro total analytical system)或称缩微
芯片实验室(laboratory on a chip)。使用
缩微芯片实验室,就可以在一个封闭的系统内以很短的时间完成从原始样品到获取所需分析结果的全套操作。
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