药物筛选细胞模型

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2021-06-10 10:10

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张老师
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产品说明

体外细胞毒性筛选

细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。有时需要进行特定物质细胞毒性的检测,比如药物筛选。
正常细胞代谢旺盛,其线粒体内的琥珀酸脱氢酶能够代谢还原四唑盐类物质如MTT,进而在细胞色素C的作用下,生成蓝色(或蓝紫色)甲臜(Formazan),甲臜在570nm处有特异光吸收,可用来测定生成量,甲臜生成量与活细胞数目成正比,以此来检测化合物对细胞的增殖和抑制情况,得知该化合物是否具有细胞毒性。
促进PC12细胞分化活性筛选模型
神经生长因子(nerve growth factorNGF)是最早发现的能够促进神经细胞存活、生长和分化的神经营养因子,已经开发应用于外周感觉性神经病、早老性痴呆等神经系统疾病的临床试验。然而,NGF的某些蛋白质性质(如化学性质不稳定、半衰期短、药代动力学特性欠佳、不易通过血脑屏障等)限制了其成为理想的临床用药。因此,寻找小分子NGF类似物成为神经系统药物开发的热点。
该模型以未分化的PC12细胞为实验对象,采用包被培养方式,以NGF为阳性对照,化合物溶媒作为对照组,诱导72h后,显微镜下观察并记录PC12细胞分化情况,统计分析细胞分化率(轴索长度≥细胞直径的细胞百分数)、具有轴索的细胞数、细胞平均轴索数、梭形细胞比例等细胞分化的形态学参数,以此筛选出具有促进PC12细胞分化活性的化合物。
钙信号筛选模型
钙(Ca)是人体内重要的必需元素之一,生物体内几乎所有的生理活动都受钙离子(Ca2+)调控。钙离子作为第二信使把外源信号转变成胞内信号,导致一系列胞内事件及生理反应的发生,如基因表达、细胞凋亡、肌肉收缩等。研究表明Ca2+的信使功能是通过调控细胞内Ca2+浓度来实现的。
该模型以细胞为检测对象,使用离子指示剂Fluo 4-AM作为细胞内Ca2+的测定技术。Fluo 4-AMFluo 4的一种乙酰甲酯衍生物(AM),通过培养,能够轻易进入细胞中。AM进入细胞后会被胞内酯酶所水解,产生Fluo 4,未结合的Fluo 4荧光很弱,与游离的钙离子(Ca2+)结合后产生强烈荧光。使用Thermo Scientific 高内涵药物筛选仪,激发光485nm5s检测一次,持续检测5min,以荧光的变化来判定细胞内钙离子浓度的变化,从而评价化合物的钙流活性,为下一步的作用机制研究提供线索。