1.取心脏
- 左手捏住大鼠背部皮肤，使用酒精棉（75%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠剑突处正中线偏左向上剪开，略压胸骨，使心脏自然跳出，用弯镊子勾住心脏根部，取出心脏，置于盛有预冷Wash buffer的培养皿中。
- 在解剖镜下使用微型镊子和解剖剪剪去心房。
2.组织清洗：经酒精擦拭后，将培养皿移入细胞房超净工作台，用预冷的Wash buffer清洗3次，去除血污后，将心脏剪成约1mm3的组织块，再清洗2次。
3.预消化
加入1-3ml Rat Cell Dissociation Solution ，37℃水浴中摇动，消化1min后弃上清。4.消化
- 在50ml离心管中加入5ml Rat Cell Dissociation Solution，37℃水浴中摇动消化7min后将上清液加入预冷的5ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium中，混合均匀并置于冰上，保持低温。
注意：每次Rat Cell Dissociation Solution使用的量可根据组织块的多少进行调整。- 重复4.A的步骤直至组织完全消化。
注意：吸取上清时尽量避免吸出沉淀。- 将收集的上清在室温下1200 rpm，离心5min，轻轻吸除上清，用Rat Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。
5.差速贴壁：
细胞通过70um/100μm滤网过滤，并通过以下方式进行差速贴壁，- 直接接种到培养板中；
- 接种到使用Ready-to-use GelⅠ包被培养板上；
A、B选择一种方法进行差速贴壁即可，放入细胞培养箱（37℃，5%CO2）中孵育60min-90min，进行差速贴壁；此时，使用Ready-to-use GelⅡ包被培养板，以备后续细胞铺板使用。注意：孵育时间根据不同品牌培养板贴壁能力不同，贴壁时间可以做出适当调整。因为不同品牌培养板贴壁能力不同，B选项进行包被，可以提高细胞贴壁比例。6.细胞铺板：
取出差速贴壁培养皿，将上清细胞悬液移入15ml离心管中，1200 rpm，离心5min，轻轻吸除上清，用已经预先加热至37℃的1-2ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。利用血细胞计数板进行细胞计数，用台盼蓝检测细胞存活率。根据所计的细胞数使用Rat Cardiomyocytes Culture Medium进行稀释调整细胞浓度，将细胞移至预先使用Ready-to-use Gel包被好的培养皿/板中。7.观察
将培养板放入细胞培养箱中培养24h后观察细胞状态，若细胞状态佳且浓度合适，则可进行后续实验。
