Cas13a检测系统用RNA荧光-淬灭荧光双标记探针

CRISPR_Cas核酸酶主要包括两类：一类是RNA引导下可以切割RNA链的Cas13a和Cas13b；另一类是RNA引导下可以切割DNA链的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一个共同特点，除了切割靶向DNA或RNA序列之外，还可以切割其他DNA或RNA序列，但是Cas13酶的这种附加切割能力比Cas12a要强。

Cas13a与Cas9最大的区别在于Cas13a结合并切割RNA，而Cas9切割DNA。从结构上来看，Cas13a含有两个HEPN结构域，而Cas9用HNH和RuvC结构域来切割DNA目标。HEPN结构域对Cas13a切割RNA目标是必需的。另外，与Cas9类似，Cas13a分子中关键残基的突变可以形成核酸酶活性缺失的Cas13a（dCas13a），它能够结合RNA目标但无法切割。

Crispr Cas13a核酸酶（又名 C2c2）是依赖于 RNA 介导的 RNA 内切核酸酶。在靶标单链 RNA 存在 PFS序 列的情况下，可特异地切割靶标 RNA。此外，Cas13a 还具有依赖于靶标单链 RNA 的反式切割活性 （即，旁路切割活性），可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒。例如，MIT 的张锋团队便利用 Cas13a 蛋白开发了名为“SHERLOCK”的下一代分子诊断系统。SHERLOCK 所使用的 Cas13a 蛋白识别靶标 RNA 并反式切割 RNA报告探 针。一般来说，双标记荧光探针法是使用5'端带有荧光物质（如：FAM等)，3'端带有淬灭物质（如:BHQ1等）的双标记荧光探针进行荧光检测的方法。当探针完整时，5'端的荧光物质受到3'端的淬灭物质的制约，不能发出荧光。而当双标记荧光探针被分解后，5'端的荧光物质便会游离出来，发出荧光。上海惠诚生物提供Cas13a检测系统用RNA荧光-淬灭荧光双标记探针。

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