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单细胞扩增

价格：￥1

品牌：xuanya

产地：美国/中国

最新更新日期：2021-06-10 10:35

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上海烜雅生物科技有限公司

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产品属性

保存条件

-20℃

保质期

两年

英文名	Single Cell Lysis Solution（DNA）Embryonic Cell Lysis Solution

数量

900

供应商	上海烜雅生物科技有限公司

规格

80次

产品说明

单细胞扩增产品及特点：
单细胞裂解液（DNA 专用）是单细胞 DNA 提取专用裂解液，产品经过多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于全基因组扩增和 PCR 等试验。本产品足够使用 200 次以上。
胚胎裂解液用于将卵裂球（blastomere，含 2-8 个细胞）分离成单个胚胎的溶液，得到的单个细胞如果用于 DNA 分析（如全基因组扩增或 PCR），则可直接用于单细胞裂解（DNA 型）裂解，如果用于 RNA 分析（如 RT-PCR），则可直接用于单细胞裂解（RNA 型）裂解。本产品不能用于胚囊（blastocyst，含 70-100 个细胞）。

单细胞扩增运输及保存：
低温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：PBS 溶液（可向xuanya另购）

单细胞扩增使用方法
如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备，此处所列步骤仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球（2-8 细胞胚胎）等材料，对其他材料（如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等），用户需自行选用合适的方法制备单细胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如 FACS 分离细胞、卵细胞等），则可以跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤：
一、准备单细胞裂解工作液：
1. 裂解一个细胞需要 2.5 uL 裂解液工作液。根据所要裂解的细胞数准备足够的裂解液工作液。工作液的制备方法是将等体积的溶液 A 和溶液 B 混合即得。
2. 在每个 200 uL PCR 管中加入 2.5 uL 新鲜制备的单细胞裂解液工作液，放置在冰上待用。

单细胞扩增二、用培养细胞或实体组织制备单细胞：
3. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基中。
4. 按常规方法对细胞进行计数。
5. 转移 100-4000 个细胞到新离心管中，400 g 离心 4 分钟沉淀细胞，小心弃上清（培养基）。
6. 将细胞沉淀重悬于 50 uL 自备的 PBS 溶液中，使其终浓度为 2-80 个细胞 /uL。
7. 在干净培养皿上点加数个 5 uL PBS 溶液小液滴，加入 5 uL 细胞悬浮液到第一个小液滴中，然后再从第一个小液滴中转移 5 uL 到第二个小液滴，如此系列稀释样品数次，使得其浓度接近每 2.5 uL 液体中含 1 个细胞，放冰上待用。三、用卵裂球（blastomere，2-8 细胞胚胎）制备单个细胞：
8. 在培养皿中点数个含 5 uL 胚胎裂解液（CAT#:130806）的小液滴。
9. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。
10. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。
11. 在最有一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。
12. 取单个细胞，转移到数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。
13. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的 2.5 uL 样品并转移到一个 200 uL 的 PCR 管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品中不含细胞）。

单细胞扩增四、用单细胞裂解液裂解细胞
14. 在显微镜下用显微注射仪取 2.5 uL 样品，确认含一个细胞后，将其转移到一个含 2.5 uL 单细胞裂解液的 PCR 管中。最好同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品中不含细胞）。
15. 在 2.5uL 样品中，显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。
16. 裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。一般-80℃放置过 30 分钟到一周时间的样品 PCR 扩增效果最好。

五、单细胞裂解物的 PCR 扩增
17. 细胞裂解物从-80℃中取出后，先在 65℃中保温 10 分钟，然后在放冰上放置待用。
18. 以上步得到的细胞裂解物为模板。按常规方法进行 PCR。

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