shRNA表达载体构建技术服务

理论支持：

目前，siRNA常用的构建方法包括化学合成、体外转录、制备表达siRNA的质粒或病毒载体等。

质粒载体由于其质量可控性好，带有筛选标记，可持续抑制靶基因表达等优势，适用于一个已知有效的siRNA序列，建立能够较长时间维持基因沉默的细胞系，方便进行进一步研究。

病毒载体具有易制备、纯化、浓缩，宿主范围广，感染率高，不整合宿主基因组，遗传毒性和免疫毒性低等优势，是目前最好的RNA干扰技术之一。适用于转染效率低、维持较短时间的基因沉默的siRNA。

服务内容：

1、表达siRNA的质粒载体的构建；

2、表达siRNA的腺病毒载体的构建；

具体操作：

1、明确需要干扰的目标基因，确定有效的干涉序列：

（1）交由专业公司进行设计和筛选；

（2）交由专业公司设计并合成siRNA，转染细胞后，检测目的基因的表达，筛选得到有效的干涉序列；

2、目的细胞转染携带报告基因的质粒载体或感染携带报告基因的重组腺病毒，采用流式细胞检测其转染效率；并根据实验结果确定构建何种载体；

3、质粒载体的构建：根据siRNA序列设计相应的shRNA序列，合成双链shRNA，将其克隆到H1启动子下游；如需要同时表达报告基因，可在干涉序列下游通过IRES连接报告基因（如EGFP、RFP等）；对载体进行测序鉴定；

4、将质粒载体转染特定细胞后，根据抗性进行筛选得到稳定表达干涉序列的细胞，用于下一步研究；

5、腺病毒载体的构建：对于质粒转染效率较低的细胞，可选用腺病毒载体，具体操作见腺病毒制备技术服务内容；

客户须知：

1、本公司负责siRNA序列筛选、载体构建及后续实验，siRNA序列的合成将委托专业公司进行；

2、客户提供目的细胞，需要保证其状态良好并提供细胞的详细信息；

服务价格：

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