慢病毒及逆转录病毒构建和包装服务

慢病毒（Lentivirus）是一种逆转录病毒，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，并将外源基因整合至宿主基因组，实现长期的稳定表达。纽恩生物在常用的慢病毒包装系统基础上做了优化和改造，不但适用于不同的细胞感染和基因操作，而且提高了病毒的出产滴度。纽恩生物在国内率先采用DNA拷贝数检测作为慢病毒及逆转录的质控方法，避免了使用RNA进行滴度检测带来的病毒滴度虚高问题，为广大科研用户提供了更为可靠的产品保证。
逆转录病毒改造自鼠白血病病毒（MMLV)，是一种RNA病毒，可以利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定长时表达。逆转录病毒特异性地感染分裂细胞，对造血干细胞和神经干细胞在体外和体内感染具有良好的效果。纽恩生物经过长期的研发，掌握了逆转录病毒载体构建和包装中的关键技术。逆转录病毒载体技术服务主要面向从事干细胞和发育研究。

纽恩生物慢病毒及逆转录病毒的优点

对于转染试剂难以转染的细胞，如原代细胞、干细胞和悬浮细胞等，使用慢病毒可显著改善感染效果，实现体内和体外的实验检测。对腺病毒感染产生较强免疫反应的细胞如树突状细胞、单核细胞和间充质干细胞，使用慢病毒和逆转录病毒可有效减少免疫反应。逆转录病毒特异性的感染分裂细胞，可以用于体内感染和示踪干细胞亚群。
我们建议研究者根据自己所操作的实验细胞和实验目的进行病毒种类的选择，不同病毒种类的特点请见下表。

表1 不同病毒的生物学特性比较

	慢病毒	逆转录病毒	腺相关病毒	腺病毒
包膜	有	有	无	有
颗粒直径	90-100 nm	90-100 nm	20-30 nm	60-90nm
基因组	dsRNA	dsRNA	ssDNA	dsDNA
表达起始时间	48-72h	48-72h	72-96h	24-48h
表达持续时间	> 2 months	> 2 months	> 6 months	< 1 month
整合方式	随机高频整合	随机高频整合	定向低频整合	非整合

慢病毒与逆转录病毒包装

慢病毒与逆转录病毒采用相似的包装体系和过程进行包装（图1）。纽恩生物根据实验应用的不同，提供不同的包装服务流程。
EasyFect服务主要针对具有贴壁生长性能的肿瘤细胞系，成纤维细胞系以及内皮来源细胞系。表达载体主要采用CMV启动子，所提供病毒为上清病毒。具有生产周期快，病毒量大，价格实惠的优点。特别是进行稳转细胞株的制备，选择双标（荧光与抗生素抗性基因）病毒的使用，将达到事半功倍的效果。
PrimFect服务主要针对悬浮细胞、原代细胞和干细胞等难感染细胞。表达载体的启动子主要为EF1a,UbiC。病毒的生产后进行浓缩，大大减少了感染操作中的病毒添加体积和风险因素，是进行难操作细胞的最佳选择。
 AccuFect服务主要针对一些特异细胞群体的感染和基因操作。具体的操作方式和服务信息请于与我们的技术支持进行交流和确认。

图1. 慢病毒包装过程

纽恩生物慢病毒和逆转录载体的应用