AP Blotting CSPD ECL 是一种含 CSPD 及增强剂的超灵敏碱性磷酸酶（AP）化学发光 底物，可直接用于硝酸纤维素膜（NC membrane）上的蛋白质或核酸印迹。该底物与 AP 混 合后，底物立即发生分解反应释放出光子，大约 10 分钟内达到最大发光水平。本产品的低 本底发光与高强度光输出相结合，能够以尽可能高的灵敏度和信噪比检测碱性磷酸酶标记。 AP Blotting CSPD ECL 为荧光底物甲基伞形酮磷酸酯(MUP) 和比色底物 pNPP 提供了高度 敏感的替代品，以卓越的灵敏度、速度和简便性检测 AP 及其标记的分子。 

目录号 Art no: CLBS-0050/ 0100/ 0250 

包装规格 Package size: 50mL/ 100mL/ 250 mL 

保质期 Shelf life: 1.5 years 

储 存 Storage: 2-8℃ 避光 

应 用 Application: Western blot / Northern blot 

用法说明 Instruction: 

以膜面积为 100cm2 的 Western blot 为例： 

1. 膜封闭：印迹膜转移后，用 PBS 或 TBS 短暂冲洗印迹，然后在 10mL 封闭液中孵育 30- 60 分钟；注：PBST 或 TBST 可用于洗涤 NC 膜或 PVDF 膜。对于尼龙膜，TBST 的背景比 PBST 略高。 

2. 孵育一抗：在 5mL 封闭液中稀释一抗至厂家推荐浓度，孵育 30-60 分钟； 

3. 洗涤：对于 NC 膜和尼龙膜，在 20 mL 洗涤液（PBST/TBST）中洗涤至少 5 分钟×3 次； 

4. 孵育二抗：在 5mL 封闭液中稀释 AP 标记的二抗至 1:50000，孵育 30-60 分钟； 

5. 洗涤：与步骤 3 一样洗涤 5 分钟×3 次，然后用 20mM Tris (含 1mM MgCl2, pH9.8) 洗涤 膜 2 分钟×2 次； 

6. 去除洗涤液：沥干膜上的洗涤液，注意不要让膜变干； 

7. 底物孵育：将 3mL 底物溶液加到印迹膜表面，孵育 5 分钟； 

8. 去除底物液：沥干底物溶液，并将膜放在显影夹中或用塑料包裹，小心去除气泡或褶皱； 

9. 膜成像：建议初始曝光 5-30 分钟，PVDF 或尼龙膜曝光时间膜通常比 NC 膜时间更短。