本蛋白提取液采用优质原料配制,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用,是经典常用的细胞组织快速蛋白提取液。本蛋白提取液提取得到的蛋白样品可以用于常规的Western Blot、IP等下游实验。
  产品特点:- 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
 - 提取过程简单方便,将蛋白提取的时间缩短至30分钟~1小时。
 - 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
 - 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
 - 总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
 - 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
 
  产品组成:| 组分 | 50mL | 100mL | 
| 组分A:蛋白提取液 | 50mL | 100mL | 
| 组分B:蛋白酶抑制剂混合物 | 100μL | 200μL | 
 保存:蛋白提取液2~8℃保存,蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期1年。  
自备器材: 离心机、振荡器、涡旋混匀器、PBS  
使用方法:- 细胞蛋白提取
- 蛋白提取液制备:
 每1mL冷的蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
 - 取5~10×106个细胞,在4℃,1000g条件下离心5~10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
 - 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
 - 每5×106个细胞中加入500μL冷的蛋白提取液,混匀后,在4℃条件下振荡15~20分钟。
- 每106个细胞,大约10mg或10μL压积,加100μL蛋白提取液。大约相当于6孔板的每孔加入100μL~150μL,或一个75cm2培养瓶加1mL。提取液和细胞应充分接触。如果蛋白提取液不足量,细胞裂解效率将会降低。
 
 - 在4℃,12000~14000g条件下离心15分钟。
 - 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
 
 - 组织蛋白提取
- 蛋白提取液制备:
 每1mL冷的蛋白提取液加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
 - 取100mg组织样本剪碎,加入1mL蛋白提取液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
 - 将组织匀浆在4℃振荡15~25分钟。
 - 在4℃,12000g条件下离心10分钟。
 - 将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
 上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
- 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:HR0329。
 - 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。