本试剂盒是一种利用荧光探针BalBoxiProbe O52进行活性氮检测的试剂盒。O52探针可自由透过细菌细胞膜进入细胞内，并被细菌细胞内的RNS氧化，产生绿色荧光物质，并稳定存在于细菌胞内。根据细菌细胞中绿色荧光的产生和强弱，可以判断细菌细胞RNS含量的变化情况。在激发波长488nm，发射波长526nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等可以检测荧光强度的设备，可以方便测定荧光情况，从而测定细菌胞内活性氮水平。
背景资料： 活性氮（reactive nitrogen species，RNS）是指NO与包括活性氧在内的化合物相互作用，生成一系列包括ONOO·及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物，这些与活性氧相对应的以NO为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮（NO）和二氧化氮（NO2）、过氧化亚硝酰阴离子（ONOO·）、亚硝酰氢（HNO）、亚硝酸根离子（NO2-）和氨等。
产品特点：1．使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
2．背景低，灵敏度高；
3．线性范围宽，使用方便。
产品组成：| 组分 | 100T | 200T | 保存 |
| 组份A：BalBoxiProbe O52荧光探针 | 100μL | 200μL | -20℃避光 |
| 组份B：10×探针稀释液 | 10mL | 20mL | 2～8℃ |
保存：-20℃，避光，有效期6个月。
保存事项：1．探针长期不用可以-20℃保存。
2．避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
3．染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4．可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5．试剂拆封后请尽快使用完！
注意事项：1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
其他说明：1．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2．O52染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3．使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4．尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5．必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
自备器材：| 仪器准备： | 1.荧光分光光度计/荧光酶标仪等
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒 |
| 试剂准备： | PBS缓冲液或者HBSS |
| 耗材准备： | 1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板 |
使用方法：A．
O52探针工作液配制：1．根据样本数量，用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。
2．根据样本数量，用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行1000倍稀释。即配成染色工作液。
B．
O52探针标记： 1．准备1mL新鲜待测菌液。
2．将待测细菌样本离心收集菌体。
3．用PBS洗涤菌体2～3次。离心收集菌体沉淀。
4．用500μL～1mL染色工作液重悬菌体。
5．在37℃避光孵育30分钟。
6．孵育结束后，离心收集菌体。
7．用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。
8．用500μL PBS重悬菌体。充分混匀。
9．取200μL加入荧光检测用96孔板。
10．置于酶标仪中，后于激发波长为488nm、发射波长526nm检测荧光强度。
C．
结果处理： 荧光强度强表示细菌活性氮强度高。
