本产品是一种在较高温度(65℃以上)时仍然保持活性的核糖核酸内切酶。本制品可以选择性识别并酶切RNA:DNA杂合双链中的RNA的磷酸二酯键，同时杂合双链中的DNA会保持完整。本制品不会降解单链或双链的RNA或DNA。
本产品在65℃以上温度时仍具有很高的酶活性，其在70℃时的半衰期可达几个小时，在高达95℃时的半衰期仍可达30分钟左右。该酶的耐高温特性使得异源双链RNA:DNA杂交分子具有更高的特异性，并在较高温度下更特异性地降解杂合双链中的RNA。Thermostable RNase H具有与常见的E.coli RNase H具有类似的酶学性质，但E.coli RNase H在高于55℃时即失活。
应用效果：A．
本产品与E.coli RNase H的热稳定性比较请参考图1。 
图1.本产品与E.coli RNase H的热稳定性比较。在20μL反应体系中加入图中指定量的Thermostable RNase H或E.coli RNase H，在65℃孵育20min后，Thermostable RNase H和E.coli RNase H分别按照其标准的反应条件(Thermostable RNase H 50℃孵育20min；E.coli RNase H 37℃孵育20min)进行RNA:DNA杂交链的酶切反应，反应完毕后立即冰浴3～5分钟并加入1μL 0.5M EDTA终止反应。取出5μL反应液，加入1μL 6×DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下180V电泳45min；之后用红色核酸染料（货号：
YT015）室温染色15min，即可拍照观察结果)。如图所示，E.coli RNase H在65℃时失去活性，而Thermostable RNase H在65℃时仍保持活性。热稳定性比较反应体系(20μL)：
● Thermostable RNase H：
50mM Tris-HCl (pH8.3),75mM KCl,3mM MgCl2,10mM DTT,400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的Thermostable RNase H (包括未经热处理和在65℃孵育20min热处理)，50℃孵育20min；
● E.coli RNase H：
20mM Tris-HCl (pH7.8),40mM KCl,8mM MgCl2,1mM DTT,400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的E.coli RNase H (包括未经热处理和在65℃孵育20min热处理)，37℃孵育20min。
B．
本产品催化降解RNA:DNA杂合双链中的RNA链的效果请参考图2： 
本产品和N公司的同类产品的效果比较图。使用本产品或竞品的Thermostable RNase H，在20μL反应体系中加入图中指定量的本制品或竞品，50℃孵育20min进行反应，反应完毕后立即冰浴3～5分钟并加入1μL 0.5M EDTA以终止反应。取出5μL反应液，加入1μL 6×DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下180V电泳45min；之后用红色核酸染料（货号：
YT015）室温染色15min，即可拍照观察结果)。如图所示，本制品与竞品相比，具有类似的催化效果。RNA:DNA杂合双链反应体系(20μL)：50mM Tris-HCl (pH8.3),75mM KCl,3mM MgCl
2,10mM DTT,400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的Thermostable RNase H，50℃孵育20min。
1．严谨的RNA结构图谱的描绘和位点特异性RNA切割；
2．与oligo (dT)杂交的mRNA的poly (A)尾的酶切去除；
3．cDNA合成后去除mRNA；用于等温扩增实验；
4．用于和特定DNA序列杂交后酶切去除特定的RNA序列，例如rRNA的去除等。
产品组成：| 组分 | 250U | 1000U | 5000U |
| Thermostable RNase H(5U/μL) | 50μL | 200μL | 1mL |
| 10×RNaseH Reaction Buffer | 150μL | 500μL | 2mL |
保存：-20℃，有效期一年。
缓冲体系： 10×RNaseH Reaction Buffer： 500mM Tris-HCl (pH8.3 at 25℃),750mM KCl,30mM MgCl
2,100mM DTT。
酶贮存液： 50mM Tris-HCl (pH7.5),100mM NaCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,0.1% Triton X-100,50% (v/v) Glycerol。
产品来源： 大肠杆菌表达的重组蛋白。
活性定义： One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1nmol of ribonucleotides from 40pmol of a fluorescently labeled 25 base pair RNA:DNA hybrid in a total reaction volume of 50μL in 20minutes at 50℃。
质量控制： 纯度大于95%，不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
失活抑制： 加入适量蛋白酶K消化或加入5%体积的0.5M EDTA pH8.0。
注意事项：1．本产品的最佳反应温度高于65℃，在95℃时仍具有活性，其在65℃时的活性是在37℃时的3～4倍。
2．本产品在使用说明中建议的反应温度是50℃，在实际实验操作中可以酌情通过提高反应温度提高其酶活性。
3．本产品的反应缓冲液中包含MgCl2，当Thermostable RNase H在高温时应用于RNA/DNA杂交链或者RNA样品时，建议适当限制反应时间和温度，以减少金属介导的单链RNA降解。
使用方法： 1．
RNA/DNA杂合双链的退火。 将单链RNA和DNA等摩尔数混合，推荐的终浓度为20μM，90℃孵育1min，然后通过梯度降温至25℃退火形成RNA:DNA杂交双链。推荐使用我公司的Annealing Buffer for RNA oligos (货号：
YT529)，并按照该产品的使用说明进行退火反应。退火后的双链如果不立即用于后续的翻译，推荐在-80℃保存。
2．
反应体系的设置。对于RNA:DNA杂合双链中的RNA链的降解，参考下表在冰浴中配制如下反应体系。
| 成分 | 用量 | 终浓度 |
| DEPC-treated Water | (17-x)μl | - |
| RNA:DNA hybrid | xμl | ≤0.1μg/μL |
| 10×RNase H Reaction Buffer | 2μL | 1× |
| Thermostable RNase H (5U/μL) | 1μL | 0.25U/μL |
| Total Volume | 20μL | - |
注意：
a．由于涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理去除RNase或者确保是RNase free的。
b．如果同时进行多个反应，可以把上表中除RNA:DNA杂合双链之外的所有溶液和酶提前混合，然后再分装到各反应管。
c．RNA:DNA杂合双链的用量可以是2μg或者更少。通常上述反应体系中的杂合双链的量不超过2μg，可以确保酶切充分。
3．
酶切反应：50℃孵育20min。 如果发现效果欠佳，可以根据杂合双链的稳定性尝试将反应温度提高至65℃或更高温度(65℃时的酶活性约是50℃时的3倍)，也可以考虑适当延长反应时间。对于去除总RNA的复杂RNA体系中的特定RNA的反应体系，酶切反应的温度可以适当摸索，例如适当提高酶切的温度，以确保更高的酶切特异性。
4．
终止反应：反应结束后加入蛋白酶K或1μL 0.5M EDTA pH8.0，终止反应。
