1．固定：将处理好的细胞爬片用4%多聚甲醛室温固定30～60分钟。
2．洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
3．通透：0.1%～0.5%的Triton X-100室温透膜10～15分钟。
4．洗涤：PBST洗2次，每次5分钟。
5．封闭：加适量Blocking Buffer (组分C)，湿盒中室温孵育30～60分钟。
6．洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
7．加一抗：按1:50用Blocking Buffer (组分C)稀释Anti-PCNA Rabbit antibody (组分A)；每个爬片中加入稀释好的Anti-PCNA Rabbit antibody (组分A)，4℃湿盒中孵育过夜。
8．洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
9．加酶标二抗：每个爬片加入适量HRP-标记驴抗兔IgG(组分B) (按1:50稀释)，室温，孵育60分钟。
10．洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
11．DAB混合液的配制：DAB混合液的配制：将50μL DAB Substrate(20X)(组分E)以及50μL DAB Chromogen(20X)(组分F)稀释到900μL DAB Buffer(组分D)中，混匀。
12．滴加50μL DAB混合液到每个爬片上，避光，室温孵育5～10分钟（视阳性组织显色情况判断）；
13．终止显色：用蒸馏水终止显色反应。
14．复染：每个组织滴加适量苏木素染液，染色1～5分钟。
·苏木素复染的时间依赖于所用的苏木素。
15．洗涤：ddH2O洗2次，每次5分钟。
16．75%乙醇中室温浸泡5分钟。
17．85%乙醇中室温浸泡5分钟。
18．95%乙醇中室温浸泡5分钟。
19．二甲苯室温浸泡15分钟。
20．中性树胶封片：加中性树胶盖玻片封片。
1．按照标准操作过程进行固定，脱蜡和水化；
2．选择合适的抗原修复方法进行抗原修复；
3．洗涤：洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
4．灭活酶处理：3%H2O2-甲醇溶液，避光，室温处理15分钟。
·如果使用HRP偶联的抗体检测，这一步骤可以在这里也可以在加入一抗之后。
5．洗涤：蒸馏水洗3次，每次2分钟。
6．封闭：加适量Blocking Buffer (组分C)，湿盒中室温孵育30～60分钟。
7．洗涤：PBS洗2次，每次5分钟。
8．弃封闭液，弃封闭液，每个爬片中加入稀释好的Anti-PCNA Rabbit antibody（1:50） (组分A)，4℃湿盒中孵育过夜。
9．洗涤：PBS洗3次，每次5分钟。
10．加酶标二抗：每个爬片加入适量HRP-标记驴抗兔IgG (组分B)（1:250～1:500），室温，孵育60分钟。
11．洗涤：PBS洗3次，每次5分钟。
12．DAB混合液的配制：将50μL DAB Substrate(20X) (组分E)以及50μL DAB Chromogen(20X) (组分F)稀释到900μL DAB Buffer (组分D)中，混匀。
13．滴加50μL DAB混合液到每个爬片上，避光，室温孵育5～10分钟（视阳性组织显色情况判断）；
14．终止显色：用蒸馏水终止显色反应。
15．复染：每个组织滴加适量苏木素染液，染色1～5分钟。
·苏木素复染的时间依赖于所用的苏木素。
16．洗涤：ddH2O洗3次，每次5分钟。
17．75%乙醇中室温浸泡5分钟。
18．85%乙醇中室温浸泡5分钟。
19．95%乙醇中室温浸泡5分钟。
20．二甲苯室温浸泡15分钟。
21．中性树胶封片：加中性树胶盖玻片封片。
