甲基化专一PCR必须要使用经过亚硫酸氢钠(biosulfite)修饰的DNA作为模板,此修饰反应需要用非甲基化的DNA和甲基化的DNA作为对照,否则无法判断样品是否甲基化。本制品就是根据此需求而开发。
产品特点:1.本制品所含的甲基化DNA是通过甲基化酶修饰人的基因组DNA而得,电泳呈单一条带。
2.本制品所含的非甲基化DNA是通过以甲基化DNA为模板进过多次nested WGA(全基因组扩增)扩增并纯化制备而得,原来的甲基化位点已经极度稀释。
3.本制品主要用于检测和优化设计的甲基化引物。
4.本制品足够50次甲基化PCR,如果每次模板使用量为20ng,每次做一个甲基化和一个非甲基化对照。
5.本制品只能用于科研。
产品组成:| 组分 | 规格 |
| 人甲基化DNA(10ng/μL) | 100μL |
| 人非甲基化DNA(10ng/μL) | 100μL |
保存:-20℃,有效期1年。
自备试剂: 超纯水、基因专一性甲基化PCR引物。
使用方法:1.按自备试剂对待测DNA样本,甲基化DNA对照,非甲基化DNA对照进行亚硫酸氢钠修饰和回收。
2.按下表设置30μL甲基化PCR反应(本制品不含所需试剂):
| 成分 | 用量 |
| 2×PCR MagicMix | 15μL |
| 亚硫酸氢钠修饰的DNA | 10~20ng |
| 甲基化PCR引物一 | 0.2~0.5μM |
| 甲基化PCR引物二 | 0.2~0.5μM |
| 超纯水 | 至30μL |
3.PCR参数需要用户自己根据引物和PCR产物的长度决定。