本制品是根据分子排阻层析可以分离分子量大小不同的分子的原理设计,专门用于将同位素和非同位素标记的核酸探针(DNA、RNA和Oligo)和没有标记上的底物分离,达到纯化探针目的的试剂盒。在分子排阻层析过程中,分子较大的标记的核酸探针(或Oligo探针)将绕过层析介质,快速穿过层析介质,分子较小的未参入到探针中的标记核苷酸)将进入层析介质中,缓慢穿过层析介质。利用这一时间差而将两者分开。
反应原理:
产品特点:1.即开即用,提供纯化所需要的所有溶液和介质,不需要单独准备每种试剂,免去用户自己摸索条件。
2.适用于PCR标记、随机引物标记、切口平移、填入法标记和其他方法标记的探针。
3.既然使用于DNA探针,也适用于RNA探针和Oligo探针。
4.能去掉绝大部分的未标记的底物、盐离子等小分子。
5.足够10次纯化使用,每次可以纯化50μL的核酸标记反应液。
6.可用于DIG、生物素、Cy3、Cy5等非同位素标记的DNA和RNA探针。由于标记分子带非极性基团,容易进入有机相,因此这些探针不能用传统的酚氯仿抽提-乙醇沉淀法纯化,更突显本方法优越性。
产品组成:| 成分 | 规格 |
| Sephadex G50层析介质 | 15mL |
| 离心层析柱(含套管) | 10套 |
| TE缓冲液(pH8.0) | 5mL |
保存:室温,有效期1年。
使用方法:1.摇晃Sephadex G50介质至均匀,迅速转移到0.5mL到离心层析柱中,套上套管。2000rpm室温离心1分钟,Sephadex G50介质将压紧在离心层析柱中。
2.倒掉套管中的穿透液。
3.再加0.5mL的摇晃后得到的SephadexG50介质,2000rpm室温离心1分钟。
4.经上述操作后将在离心层析柱中得到体积约为0.5mL压紧后的SephadexG50介质。
5.倒掉套管中的穿透液。
6.在Sephadex G50界面上加入50μL TE缓冲液,套上套管,2000rpm室温准确离心1分钟,测量并记录收集管中穿透液的体积。
7.重复上步,直到收集管中穿透液的体积变得跟加入的TE缓冲液体积一样时(都是50μL)。一般需要3~5次。
8.将50μL的探针标记反应液加到柱子中Sephadex G50界面的上面并套上一个自备的(最好是硅化的)1.5mL塑料离心管。
注意:必须探针标记反应液体积必须是50μL。如果体积不到50μL,需要用自备超纯水补足到50μL。如果体积超过50μL,则需要浓缩或只使用其中的50μL。
9.2000rpm室温准确离心1分钟,穿透到离心管中的溶液将含标记探针,未参入的标记物将滞留在层析介质中。
10.电泳或点杂交检测探针回收效率后直接使用或放-20℃长期保存。本制品不含相关试剂。