本试剂盒采用SABC-FITC荧光显色和SABC-POD酶促显色双显色原理，适用于一抗类型为兔IgG的免疫组化检测。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。免疫组化双显色试剂盒采用荧光素FITC及过氧化物酶POD标记的链酶亲和素（SABC-FITC ＋ SABC-POD）。FITC在490～495nm激发，在520～530nm发射荧光，在荧光显微镜下呈明亮黄绿色。SABC-POD在加入显色底物DAB显示后，染色呈棕黄色。用户根据实验需要，可在同一张切片上用两套显示系统观察。
A．
石蜡片热修复染色步骤：1．石蜡切片，常规脱蜡至水。
2．根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
3．热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
4．滴加稀释的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，室温20min，甩干，勿洗。
5．滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
6．滴加生物素化山羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
7．滴加稀释的SABC-FITC或SABC-POD，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
8．显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB (
ZN2968)或AEC (
ZN1963)。自来水充分冲洗。
9．苏木素(
ZN1971)复染，染色时间为0.5～2min。脱水，透明。
10．选用中性树胶，水溶性封片剂(
ZN2946)或其他适当的封片剂封片。
11．结果观察。荧光显微镜下有黄绿色颗粒者为阳性染色。普通光学显微镜下有棕黄色颗粒者为阳性染色。
B．
石蜡片酶消化染色步骤： 将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液(
ZN1952)、胰蛋白酶(
ZN2944)、胃蛋白酶(
ZN2945)消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
C．
石蜡切片酶不消化/修复程序： 对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
D．
细胞片的染色步骤：1．爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
2．固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
3．打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
4．酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液(
ZN1952)、胰蛋白酶(
ZN2944)、胃蛋白酶(
ZN2945)。蒸馏水洗2min×3次。
5．滴加稀释的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，室温20min，甩干，勿洗。
6．滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
7．滴加生物素化山羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
8．滴加稀释的SABC-FITC或SABC-POD，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
9．显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB (
ZN2968)或AEC (
ZN1963)。自来水充分冲洗。
10．苏木素(
ZN1971)复染，染色时间为0.5～2min。脱水，透明。
11．选用中性树胶，水溶性封片剂(
ZN2946)或其他适当的封片剂封片。
12．结果观察。荧光显微镜下有黄绿色颗粒者为阳性染色。普通光学显微镜下有棕黄色颗粒者为阳性染色。
