虾碱性磷酸酶催化DNA和RNA的5'和3'磷酸单脂的去磷酸化反应,也可水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸(NTP和dNTP)。该酶在分子生物学研究中应用广泛,如去除DNA和RNA末端的磷酸基团,用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中,载体经虾碱性磷酸酶去磷酸化后因5'端无磷酸基团,因而不可以和自身3'端连接。虾碱性磷酸酶可作用于5’突出端、凹陷端和平末端,也可用来降解PCR反应中的游离dNTP,用于制备测序模板和SNP分析。该虾碱性磷酸酶在65℃温育5分钟即可完全的、不可逆的失活,因此,在连接或末端标记之后,可以不用去除。基于以上特性,该酶是传统去磷酸化酶--小牛肠碱性磷酸酶的绝佳替代物。
产品应用:● DNA和RNA的去磷酸化;
● 防止克隆载体的自连;
● 制备5′末端标记模板;
● 去除PCR产物中的dNTP和焦磷酸盐。
单位定义: 1单位指在25℃条件下,30分钟能使1μg经HindIII(产生5'突出末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制>95%的DNA再连接。
产品组成:| 组分 | 500U | 5000U |
| Shrimp Alkaline Phosphatase(5U/μL) | 100μL | 1mL |
| 10×SAP Buffer | 1mL | 10×1mL |
保存:-20℃可保存3年。
反应条件: 1×SAP Buffer,25℃温育
缓冲体系: 1×SAP Buffer: 50mM Bis-Tris HCl pH6.0,1mM MgCl
2,0.1mM ZnCl
2。
酶热失活: 65℃加热5分钟,不可逆失活。
注意事项:1.该酶通常用于酶切载体的去磷酸化,因其不可逆热失活特性。当完成去磷酸化反应后,无需再纯化产物,可以直接用于后续连接反应。
2.虾碱性磷酸酶也可以用来降解PCR反应中的游离dNTP,用于制备测序模板和SNP分析。同样无需纯化,可直接用于下游实验。