本产品是一种在大抽杆菌中重组表达的同时带有GST标签和His标签的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)、His或者其它标签的蛋白酶。

本产品较适用于酶切带His标签的蛋白，因为酶切后没有完全酶切的重组蛋白蛋白、切除下来的His标签以及TEV蛋白酶(GST和His标签)都可以结合于镍柱上而被除去，穿柱液中则含有所需的靶蛋白；本产品与TEV蛋白酶(His标签，货号：YT984)相比，还比较适用于酶切带有GST标签的重组蛋白，因为酶切后没有完全酶切的重组蛋白、切除的GST标签以及TEV蛋白酶(GST和His标签)都可以结合于GST纯化介质上而被除去，穿柱液中则含有所需的靶蛋白。

建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N端，并在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入TEV Protease专一性识别与酶切的上述七肽序列。这样在GST或His标签被酶切后，在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。构建含有TEV Protease专一性识别位点的目的蛋白表达质粒，可以考虑选购百奥莱博的质粒pET-N-His-TEV (货号：YT976)。

活性条件：

TEV Protease的最佳酶切温度是30℃，在29～34℃范围内均具有较高的酶活性，但当温度达到或高于高37℃时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃用TEV Protease酶切过夜。TEV Protease在pH6.0～9.0范围内具有活性，而当pH小于或等于5时，会失去酶活性。

TEV Protease的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin、E-64、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV Protease的酶活力，因为天然的TEV Protease含有其维持酶活力所必需的Cys151。

TEV Protease还有一个突出的优点是在400mM咪唑中仍有较高活力，因此对于很多用镍柱纯化的His标签目的蛋白，可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中，在4℃边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白，溶液中带有His标签的本TEV Protease以及切除下来的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。His标签蛋白的纯化可以考虑选购百奥莱博的GoldBalb His-tag Purification Resin(还原螯合耐受型，货号：YT616)或His标签蛋白纯化试剂盒(还原螯合耐受型，货号：YT046)以及百奥莱博的GoldBalb His-tag Purification Resin (变性剂耐受型，货号：YTB4204)或His标签蛋白纯化试剂盒(变性剂耐受型，货号：YTB046)。

应用效果：

图1．本产品切割GST标签蛋白的效果图。含有TEV Protease识别位点的76kD GST标签蛋白与TEV Protease进行反应，底物的用量为3μg，酶的用量依次为0、0.1、0.25、0.5、0.67、1、2U，30℃在1×TEV Buffer中反应1小时后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约50kD的目的蛋白和约26kD的GST标签。

单位定义：
30℃，pH8.0条件下反应1小时，能够切割3μg对照底物达85%以上所需的酶量为一个活性单位。

技术指标：
分子量：28kDa
纯度：≥95%

产品组成：

组分	1KU	10KU
TEV蛋白酶(GST和His标签，1U/μL)	1mL	10mL
10×TEV Buffer	2mL	20mL

保存：-20℃。

规格说明：
本制品每mL含有1000单位的酶，可用于约3mg带有TEV Protease识别位点的融合蛋白的切割。

酶贮存液：
25mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，5mM DTT，50%(v/v)甘油，pH8.0。

缓冲体系：
10×TEV Buffer：
500mM Tris-HCl，500mM NaCl，5mM EDTA，10mM DTT，pH8.0。

使用方法：
由于不同标签蛋白具有不同的特性，所以在实际使用时，建议对酶和标签蛋白的比例进行适当优化，以下是一个简单的估计酶用量的实验方案。