a．选择合适的裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。优先推荐选择百奥莱博的WB及IP细胞裂解液(货号：
YT038)用于细胞或组织样品的裂解。根据特定的实验目的，如有必要，也可以使用百奥莱博的RIPA裂解液(强，货号
YT609)、RIPA裂解液(中，货号
YT610)或RIPA裂解液(弱，货号
YT611)用于样品的制备。如果使用自行配制的或其它公司生产的裂解液，需要确保裂解液的pH为6～8。
b．具体的细胞或组织样品裂解的制备步骤请参考裂解液的使用说明。制备好的裂解液上清宜置于冰上或4℃存放，随后即可用于免疫沉淀或免疫共沉淀、标签蛋白的纯化等操作。新鲜制备好的样品，建议尽量当天完成免疫沉淀等后续操作，但如果样品不能当天使用，也可以适当分装后-80℃冻存。
a．用移液器轻轻吹打重悬小鼠IgG磁珠，按照每500μL样品10μL或20μL磁珠悬浊液，取适量小鼠IgG磁珠至一洁净离心管中(货号：
YTB8001)，加入1×TBS(货号：
YTB1280、
YTB1282)至最终体积为约0.5mL。说明：如果初始体积大于0.2mL，可以考虑先直接置于磁力架上分离10秒，去除上清，然后再加入1×TBS至最终体积为约0.5mL。
b．用移液器轻轻吹打重悬小鼠IgG磁珠。置于磁力架上分离10秒，去除上清。重复上述步骤两次。
c．按照初始体积的量，用1×TBS重悬小鼠IgG磁珠。
a．
3X Flag竞争洗脱法： 本方法为非变性法，洗脱效率高，且洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续分析检测。
① 3X Flag多肽洗脱液的配制：取适量3X Flag多肽(
YTB1290)溶解于1×TBS中，使其终浓度为150μg/ml，或稀释5mg/ml的3X Flag多肽溶液(
YTB1290)至150μg/ml。
② 每10～20μL原始磁珠体积，加入100μL 3X Flag多肽洗脱液(150μg/ml)，混匀后置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温摇晃孵育30～60分钟，或4℃孵育1～2小时。为了提高洗脱效率，可延长孵育时间或重复洗脱。
③ 孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，将上清转移到新的离心管中。上清即为洗脱的Flag标签蛋白。
④ 洗脱的Flag标签蛋白置于4℃待用，或者-20℃或-80℃长期保存。
b．
酸性洗脱法： 本方法为非变性法，比较快速且高效。洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续分析检测。
① 溶液的配制：酸性洗脱液(0.1M Glycine-HCl,pH3.0)，中和液(0.5M Tris-HCl,pH7.4,1.5M NaCl)。
② 每10～20μL原始磁珠体积，加入100μL酸性洗脱液，混匀后置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温孵育5分钟。
注：孵育时间不宜超过15分钟。
注：洗脱液的体积可以酌情适当调整，同时须注意后续的中和液体积也需要作相应调整。
③ 孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，将上清转移到新的离心管中，并立刻加入10μL中和液，适当混匀。
④ 为了获得最大的洗脱效率，可重复步骤②和③，并将相同样品合并。
⑤ 洗脱并中和的目的蛋白置于4℃待用，或者-20℃或-80℃长期保存。
注1：酸性洗脱法虽然高效，但仍可能低于竞争洗脱法或SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法。
注2：由于目的蛋白的差异可能对酸性洗脱法的洗脱效率有一定的影响，如果对洗脱效率的要求比较高，可对酸性洗脱液的pH在2.5～3.1之间进行一定的调整，相应的中和液的pH值或量也要进行一定的调整，例如100μL酸性洗脱液(0.1M Glycine-HCl,pH2.8)和15μL中和液(1M Tris-HCl,pH8.5)。
c．
SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法： 本方法为变性法，得到的蛋白样品适合SDS-PAGE电泳或WB检测。
① SDS-PAGE上样缓冲液的配制：可以直接使用百奥莱博的1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(货号：
YT050)，或使用百奥莱博的5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(货号：
YT620)或自行参考《分子克隆》等配制5X或2×的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，然后加入水配制成1×的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。通常SDS-PAGE蛋白上样缓冲液含有DTT等还原剂，其洗脱得到的蛋白样品中会含有Flag抗体的轻链和重链。
② 每10～20μL原始磁珠体积的磁珠，加入100μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，95℃加热5分钟。
③ 置于磁力架上分离10秒，取上清进行SDS-PAGE电泳或Western检测。
