本产品是TaqMan探针法microRNA荧光定量PCR试剂盒,采用特异性的正向miRNA引物和接头引物进行PCR扩增,检测荧光基团FAM标记的TaqMan探针。
本试剂盒可以高特异性、高灵敏度的检测低至100个细胞的miRNA分子,并可区分相似度极高的miRNAs。我公司的TaqMan miRNA定量PCR试剂盒多达一万余种,试剂盒编号为MTTxxxxx,每一个mircoRNA分子对应一个检测试剂盒(包含特异性的TaqMan探针、正向引物、反向引物、定量试剂)。
特别说明: 如您研究的miRNA不在我们的
TaqMan microRNA qPCR Kit列表之中,请登录www.mirbase.org进行miRNA查询,并来信告知Accession No.和序列,我们将在2~3周内完成试剂盒的定制。
检测原理:
应用效果:1.
高灵敏度(最高可到0.1fM级水平)
2.
高特异性,有效区分单碱基差异
3.
应用实例 
产品组成:| 组分 | 规格 |
| 5×TaqMan qPCR Mix | 400μL |
| 20×miRNA TaqMan Assay | 100μL |
保存:-20℃避光,避免反复冻融,有效期2年。
使用方法:1.
配制反应体系 按下表加入各成分配制20μL PCR反应体系:
| 成分 | 用量 |
| 5×TaqMan qPCR Mix | 4μL |
| 20×miRNA TaqMan Assay | 1μL |
| cDNA模板 | 1~2.5μL |
| ddH2O | 至20μL |
注意:cDNA模板来自于microRNA反转录产物(货号:
MT0006)。
2.
进行Real-Time PCR反应 通常采用两步法,程序如下:
| 温度 | 时间 | 循环数 |
| 95℃ | 15min | 1 |
| 95℃ | 10s | 40 |
| 60℃ | 30s |
| 收集信号采用FAM染料通道,Rox矫正信号选择None |
3.
反应结束后确认Real-Time PCR的cDNA样品和NTC阴性对照的扩增曲线。 