细胞周期检测试剂盒 产品官方链接

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北京
2026-02-04 10:53

北京百奥莱博科技有限公司

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王欣
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北京百奥莱博科技有限公司
产品属性
货号KFS314
规格20T|50T
产品说明

本试剂盒可应用于培养细胞(悬浮、贴壁)的DNA含量(细胞周期)检测。



背景资料:

细胞周期(cell cycle)是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。在这个过程中,细胞遗传物质复制并加倍,且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周期又可以分为间期(interphase)和有丝分裂期(M phase),细胞间期又常划分为休眠期(G0),DNA合成前期(G1),DNA合成期(S),DNA合成后期(G2),整个周期可表示为G1→S→G2→M。DNA周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况,即细胞增殖状况。利用细胞内DNA能够和荧光染料(如碘化丙啶PI)结合的特性,细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同,流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。



检测原理:

细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核裂解,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期,细胞对前向角光散射的能力显著降低,对90°角光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期,前向角和90°角光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察凋亡细胞。用PI对细胞进行染色,凋亡细胞由于总DNA量降低,于正常G0/G1细胞群前出现DNA低染细胞群,即G1峰前出现亚二倍体峰(sub-G1),细胞凋亡群。



产品组成:
组分20T50T保存
RNase A1mL2.5mL-20℃
Propidium Iodide(PI)9mL22.5mL2~8℃避光

保存:-20℃,避光。

自备器材:
流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5mL Microtube、70%乙醇、PBS。

注意事项:
1.微量试剂取用前请离心集液。
2.Propidium Iodide (PI)避光保存及使用,PI有毒,操作时请戴手套。


操作方法:
1.用适当的方法建立检测模型,同时设立阴性对照组,并收集细胞;根据样本数量,计算所需要的染色工作液体积,每样本500μL工作液孵育;临用前将Rnase A:PI工作液按1:9体积配制成染色工作液。
2.用PBS洗涤细胞一次(离心2000rpm,5min)收集并调整细胞浓度为1×106/ml,取1mL单细胞悬液;
3.制备的单细胞悬液离心后,去除上清,在细胞中加入体积分数为70%冷乙醇500μL固定(2小时至过夜),4℃保存,染色前用PBS洗去固定液;(如需要,细胞悬液用200目筛网过滤一次);离心洗涤条件可参考1000rpm,3min;
4.加入提前配制好的500μL PI/RNase A染色工作液,室温避光30~60min;
5.上机检测,记录激发波长488nm处红色荧光。