本试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体膜蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，请使用其它货号的试剂盒。
产品特点：1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品组成：| 组分 | 50T | 100T |
| 试剂A | 10mL | 20mL |
| 试剂B | 10mL | 20mL |
| 试剂C | 10mL | 20mL |
| 试剂D | 10mL | 20mL |
| 稀释液E | 10mL | 20mL |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | 200μL | 400μL |
保存：试剂AB于2～8℃保存，长期存放于-20℃保存；试剂D于2～8℃保存；试剂C和E室温保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存，有效期1年。
自备器材： 移液器、离心机、涡旋振荡器
注意事项：1．旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2．实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3．蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4．可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5．最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1mL玻璃匀浆器匀浆也可。也可采用超声破碎的方法，建议功率30w，10s。采用普通匀浆器或超声破碎，建议镜检，保证细胞80%以上的破碎率。
6．每200μL试剂C和试剂D加入2μL蛋白酶抑制剂混合物混匀备用。
使用方法：1．取2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2～3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
注：细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。由于膜蛋白含量较少，需要较多的细胞才能保证得率。
2．用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．加入200μL冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．Dounce匀浆器匀浆30～40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6．在4℃，11000×g以上条件下离心20钟。
7．取步骤6的上清于另一干净离心管中，加入200μL试剂C混匀，在4℃，11000×g以上条件下离心5分钟，取上清，即得胞浆蛋白。
8．在步骤6的沉淀中加入200μL冷的试剂B，混匀。
9．在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。弃上清。
10．在步骤9沉淀中加入加入200μL冷的试剂D，2μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上15～20分钟，每隔5分钟涡旋振荡15秒。
11．37℃水浴10分钟。
12．37℃下2000×g离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层约为20μL。
注：必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2～3分钟。
13．小心吸取上层丢弃或者小心吸出下层。
14．用80～150μL稀释液E稀释所得的下层部分，即得线粒体膜蛋白。
15．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注：
● 用BCA法进行蛋白定量。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
