a.电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1小时或更长时间。
注:具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近,在染色液中几乎看不清凝胶时,可以认为已染色充分。染色2~4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
c.倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2~3次。
d.加入适量脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
注:脱色液可以选购百奥莱博的考马斯亮蓝染色脱色液(货号:
YT058);如果希望自行配制,推荐的脱色液配方为:40%乙醇,10%乙酸,50%蒸馏水。也可以使用其它适当的脱色液。
e.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色4~24小时。期间更换脱色液2~4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1~2小时后即可出现。
注:脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使部分染料吸附在吸水纸上,加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
f.完成脱色后,可以把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。
a.电泳结束后,取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧,在发生煮沸时不易破损;对于胶浓度小于10%的胶,宜尽量避免煮沸,以免出现胶碎裂的情况。
b.随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动5~10分钟。
c.倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2~3次。
d.加入适量脱色液,确保染色液可以充分覆盖凝胶。
注:脱色液可以选购百奥莱博的考马斯亮蓝染色脱色液(货号:
YT058);如果希望自行配制,推荐的脱色液配方为:40%乙醇,10%乙酸,50%蒸馏水。也可以使用其它适当的脱色液。
e.微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。
f.随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5~10分钟。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
g.更换新鲜的脱色液,重复步骤e和步骤f,直至蓝色背景基本上全部被脱去,蛋白条带染色效果达到预期。
h.完成脱色后,可以把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。