本试剂盒含有FITC标记的驴抗小鼠IgG(H+L)抗体，可以用于检测小鼠来源的相应一抗，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下可以观察到鲜艳的绿色。
FITC是一种常用的绿色荧光探针。FITC的吸收(激发)和发射峰分别为492nm和520nm。
产品特点：1．本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。
2．操作简便，灵敏度高。
产品组成：| 组分 | 100T | 300T |
| 封闭液 | 10mL | 30mL |
| 驴抗小鼠FITC标记二抗 | 100μL | 300μL |
| 免疫荧光染色二抗稀释液 | 30mL | 90mL |
| 抗荧光淬灭封片液 | 3mL | 10mL |
保存：2～8℃，有效期1年。其中驴抗小鼠FITC标记二抗和抗荧光淬灭封片液-20℃避光保存。
注意事项：1．荧光物质均易发生淬灭，染色后需尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。
2．如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度或适当提高荧光标记抗体的浓度。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤：A．
免疫荧光染色的准备工作 荧光标记二抗的稀释：将荧光标记的二抗按照1:50～200的比例用本试剂盒提供的免疫荧光染色二抗稀释液进行稀释。根据荧光的强弱，其稀释比例可以适当地提高或降低。
B．
贴壁细胞1．细胞爬片，PBST洗3次，每次5min。
2．加入1mL预冷的固定液，室温固定10min或更长时间。
3．PBST洗3次，每次5min。
4．0.1-0.5%Triton X-100室温通透10～15min。
5．PBST洗3次，每次5min。
6．封闭液室温封闭30～45min。
7．一抗室温孵育60min，为增强与一抗的结合，建议4℃孵育过夜，次日室温孵育60min。
8．PBST洗4次，每次5min。
9．加入50μL稀释的荧光标记的二抗，避光孵育45～60min。
10．PBST洗3次，每次5min，期间适当注意避光操作。
11．如有需要可进行DAPI或Hoechst复染细胞核。
12．抗荧光淬灭封片液封片，指甲油密封盖玻片。
13．荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。
C．
悬浮细胞1．离心收集细胞样品于1.5mL离心管中，去掉上清后轻轻弹散细胞。
2．加入0.5mL固定液，混悬细胞，固定10min或更长时间。
3．离心去除固定液，PBST洗3次，每次5min。
4．0.1-0.5%Triton X-100室温通透10～15min。
5．PBST洗3次，每次5min。
6．最后一次离心后吸除大部分液体并保留50μL液体，再缓缓悬起细胞，滴加至防脱载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
7．稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
8．封闭液室温封闭30～45min。
9．一抗室温孵育60min，为增强与一抗的结合，建议4℃孵育过夜，次日室温孵育60min。
10．PBST洗4次，每次5min。
11．加入50μL稀释的荧光标记的二抗，避光孵育45～60min。
12．PBST洗3次，每次5min，期间适当注意避光操作。
13．如有需要可进行DAPI或Hoechst复染细胞核。
14．抗荧光淬灭封片液封片，指甲油密封盖玻片。
15．荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。
D．
冰冻切片1．用固定液固定10min或更长时间。
2．PBST洗3次，每次5min。
3．封闭液室温封闭30～45min。
4．一抗室温孵育60min，为增强与一抗的结合，可以4℃孵育过夜，次日室温孵育60min。
5．PBST洗4次，每次5min。
6．加入50μL稀释的荧光标记的二抗，避光孵育45～60min。
7．PBST洗3次，每次5min，期间适当注意避光操作。
8．如有需要可进行DAPI或Hoechst复染细胞核。
9．抗荧光淬灭封片液封片，指甲油密封盖玻片。
10．荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。
E．
石蜡切片1．切片常规脱蜡至水。
2．根据每一种抗体的要求，对组织进行相应的抗原修复，也可选用本公司生产的抗原修复液。
3．PBST洗3次，每次5min。
4．封闭液室温封闭30～45min。
5．一抗室温孵育60min，为增强与一抗的结合，可以4℃孵育过夜，次日室温孵育60min。
6．PBST洗4次，每次5min。
7．加入50μL稀释的荧光标记的二抗，避光孵育45～60min。
8．PBST洗3次，每次5min，期间适当注意避光操作。
9．如有需要可进行DAPI或Hoechst复染细胞核。
10．抗荧光淬灭封片液封片，指甲油密封盖玻片。
11．荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。
