DOP-PCR即简并寡聚核苷酸引物PCR,是扩增全基因组的方法之一,它利用中间含有6个随机碱基的22nt引物,通过两轮PCR(第一轮低温复性,第二轮高温复性)而将模板DNA扩增。DOP-PCR扩完整基因组的效率不如利用phi 29 DNA聚合酶的MDA,但在扩增高度降解的痕量DNA 方面具有巨大优势,在法医鉴定领域具有重要应用。本产品就是在DOP-PCR基础上进行优化而开发。
产品特点: 1. 专门用于高度降解的DNA,方便,含有除模板DNA和引物以外的所有成份,简化了准备工作。
2. 优化的引物浓度,使自连序列和非模板相关序列的合成。
3. 使用高保真酶,降低突变率。
4. 长度在300-1700bp 之间,平均500bp左右。
5. 模板基因DNA 用量一般为10-100pg。
6. 所得PCR产物可用于STR 多重扩增、比较基因组杂交、单染色体文库构建、基因组图谱研究等。
试剂盒组成:| 成分 | 规格 |
| DOP-PCR Magic Mix | 750μl |
| DOP-PCR引物(20pmol/μL) | 250μL |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输、-20℃保存,保存期限为12个月。不要反复冻融。
使用方法: 1.在一干净的PCR 管中,加入下列成分:
| 成分 | 阴性对照 | 样品 |
| DOP-PCR MagicMix | 25μL | 25μL |
| 基因组DNA模板(自备)或单个细胞 | 不加 | 10-100pg(或一个单个细胞) |
| DOP-PCR引物(20 pmol/μL) | 5μl | 5μl |
| 补水到 | 50μl | 50μl |
2. 放入PCR仪中按下列参数进行DOP-PCR。
| 预变性 | 95℃ | 5min |
| 第一轮PCR(12个循环) | 94℃ | 1min |
| 30℃ | 1.5min |
| 72℃(30℃升到72℃的时间设定为3分钟) | 3min |
| 第二轮PCR(35个循环) | 94℃ | 1min |
| 62℃ | 1min |
| 72℃(每次循环后此步的保温时间延长14秒) | 2min |
| 延伸 | 72℃ | 7min |
| 4℃ | Forever |
3.结束后取5-10μl直接上样电泳(不需要额外再加DNA上样液),红色染料电泳速度相当于50bp DNA片段。DOP-PCR产物的长度一般在300-1700bp之间。
4. 所得DOP-PCR产物可以用于后续PCR检测或其他分析。