考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用百奥莱博生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
产品组成：| 组成 | 规格 | 保存 |
| 5×G250染色液 | 100mL | 2～8℃ |
| PBS稀释液 | 30mL | 2～8℃ |
| 蛋白标准(5mg/mL BSA) | 1mL | -20℃ |
操作说明（仅供参数）：
一、微孔酶标仪法1．完全溶解蛋白标准品，取10μL，稀释至250μL，使终浓度为0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2．5×G250染色液使用前请颠倒3～5次混匀，取1mL 5×G250染色液，加入4mL双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3．将标准品按0、2、4、6、8、12、16、20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。
4．将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5．各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3～5分钟。
6．用酶标仪测定A595，或560～610nm之间的其它波长的吸光度。
7．根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二、分光光度计法 如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。步骤如下：
1．取八支（或者更多）干净的10mL离心管，标记上号。
2．取100μLBSA加入PBS 2.4mL稀释至终浓度为0.2mg/mL。
3．5×G250染色液使用前请颠倒3～5次混匀，取10mL 5×G250染色液，加入40mL双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4．按下表加入试剂(以每孔5mL计，多余的用来清洗比色皿)
| 离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7（样品管1） | 8（样品管2） | 9（样品管3） |
| 标准蛋白BSA | 0μL | 100μL | 200μL | 300μL | 400μL | 500μL | 500μL适当稀
释的样品1 | 500μL适当稀
释的样品2 | …… |
| PBS | 500μL | 400μL | 300μL | 200μL | 100μL | 0μL | 0μL | 0μL | 0μL |
| 1×G250染色液 | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL |
5．反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。如下表：
| 离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | …… |
| 加染色液（分钟） | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | …… |
| 测OD值 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | …… |
此图为伯乐酶标仪680，单波长，570nm测得。室温反应三分钟。
