螯合的Sepharose，当带有Ni
2+离子时，如果形成氨基酸残基的复合物，特别是组氨酸残基被暴露在蛋白质表面时，可以选择性的结合蛋白质。6*His融合蛋白可以很容易的结合到亲和柱上，然后用含有咪唑的缓冲液进行洗脱。
应用实例： 
图例，哺乳动物细胞表达的HIS标签蛋白，其细胞分泌上清通过IMAC(His)柱进行富集浓缩，高效地纯化回收。
泳道1：上样；
泳道M：Protein Marker；
泳道3：流出；
泳道4：洗脱1；
泳道5：洗脱2；
泳道6：洗脱3。
产品组成：| 组分 | 规格 |
| IMAC(His) Prepacked Column | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
保存：用20%的乙醇在中性pH值的条件下冲洗介质和柱子，4～8℃条件下储存。
基本信息：| 柱床参数： |
| 柱床体积 | Chelating Sepharose
Fast Flow,1mL |
| 结合能力 | 12mg介质 |
| 推荐工作流速 | 1mL/min |
| 最大运行背景压力(MPa/psi) | 0.3/43 |
| 填料性质及化学稳定性： |
| 产品 | Chelating Sepharose Fast Flow |
| 组成 | 亚氨二醋酸通过间隔臂，使用环氧树脂偶联到SepharoseFast Flow |
| 配给密度 | 22～30μM Zn2+/ml |
| pH稳定性 | 短期2~14，长期3~13 |
| 平均颗粒尺寸 | 90μm |
使用建议： 建议使用高纯度的咪唑，高纯度的咪唑在280nm的吸光值较低，甚至不显示吸光值。缓冲液中咪唑的最佳浓度因蛋白的浓度和性质而异。
如果重组His标签蛋白是以包涵体的形式表达，建议在各缓冲液或样品中添加6M盐酸胍或8M尿素。使用高浓度的尿素或盐酸胍，有可能引起蛋白变性，变性蛋白可以实现复性。
当纯化柱所需柱压明显升高时，则需要清洗，清洗方法如下：
a．用至少5～10倍体积的100mM EDTA清洗柱体；
b．用10倍体积的1.5M NaCl清洗柱体；
c．用10倍体积的蒸馏水清洗柱体；
d．用0.2M NaOH处理1～2小时（清除内毒素需12小时）；
e．用10倍体积的蒸馏水清洗柱体；
f．用2倍体积0.1～0.5%的非离子去污剂（溶于0.1M醋酸）处理1～2小时；
g．用5倍体积70%的乙醇清洗柱体；
h．用10倍体积的蒸馏水清洗柱体。
操作方法： 一、试剂准备：● 镍溶液：0.1M NiSO4。
● 结合缓冲液：20mM磷酸纳，0.25M NaCl，10mM咪唑，pH7.4。
● 洗脱缓冲液：20mM磷酸纳，0.25M NaCl，500mM咪唑，pH7.4。
二、操作步骤：1．将注射器或蠕动泵的管子注满结合缓冲液，将预装柱与注射器（通过附带的接头）或蠕动泵的管子连接，要保证连接紧密，防止引入空气。
2．旋出末端堵头。
3．用5倍柱体积的蒸馏水冲洗柱子。
4．用5倍柱体积的0.1M Ni2SO4激活介质。
5．用10倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子。
6．样品以1mL/min（1mL的柱子），或者2～3mL/min（5mL的柱子）的流速注入预装柱中，收集流穿物。
7．用5～10倍柱体积的结合缓冲液平衡层析柱。
8．用3～5倍柱体积洗脱缓冲液进行步级或连续洗脱。
