1．细胞固定：将爬有细胞的盖玻片用PBS洗两遍，然后加入4%的多聚甲醛固定1h-2h。
2．水化：将固定好的细胞爬片加几滴PBS覆盖15分钟，然后用PBS洗三遍。
3．通透：在爬片上加细胞通透液(0.1% Triton -X)，冰上放置5分钟。
4．洗涤：以洗涤液浸泡5分钟，清洗3次。

1．预处理：在脱蜡之前，将切片60℃恒温箱中烘烤60分钟。
2．脱蜡：将切片用二甲苯浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟。
3．水化：分别用无水乙醇中浸泡5分钟；95%乙醇中浸泡5分钟；85%乙醇中浸泡5分钟；70%乙醇中浸泡5分钟。
4．洗涤：PBS浸泡5分钟，清洗3次。
5．抗原修复：将放有切片的耐高温塑料染色架放入盛有抗原修复缓冲液的烧杯中，高火档至煮沸，将烧杯取出置于电热器上保持微沸状态20分钟，而后将烧杯浸入流水中(不可将玻片从缓冲液中取出冷却)，自然冷却。
6．洗涤：PBS浸泡5分钟，清洗3次。

1．内源性HRP酶灭活：滴加内源性HRP酶灭活液覆盖样本，冰上放置5分钟。
2．洗涤：PBS浸泡2分钟，清洗3次。
3．封闭：每片滴加50～100μL的试剂A，37度湿盒孵育10分钟后，再以洗涤液浸泡2分钟，清洗3次。
4．一抗孵育：以预先配置好的抗体稀释液稀释一抗，现用现配。加入一抗100μL(以可覆盖样本为准)，每片1μg抗体。37℃，湿盒孵育1小时。
5．洗涤：以PBS浸泡2分钟，清洗3次。
6．二抗孵育：滴加50μL试剂B覆盖样本，37℃湿盒孵育10分钟。
7．洗涤：PBS浸泡2分钟，清洗5次。
8．链接：每片滴加50μL试剂C覆盖样本，37℃湿盒孵育10分钟
9．DAB法显色：制备DAB显色液(现用现配，参见附表1)，每片加一滴，室温显色2～5min。
10．终止显色：镜下观察染色深浅，染好立即中止，用自来水轻柔冲洗15分钟用蒸馏水终止显色反应。
11．复染：将切片放入苏木素染液，染色5min，用蒸馏水冲洗干净。
12．封片：1%盐酸酒精分化20秒，立即用蒸馏水冲洗干净。分别用70%酒精浸泡5分钟；85%乙醇中浸泡5分钟；95%乙醇中浸泡5分钟；无水乙醇乙醇中浸泡5分钟。用二甲苯浸泡5分钟，更换二甲苯后再浸泡5分钟。晾干后在切片上加中性树胶，加盖玻片。
13．观察：光学显微镜检测，拍照。