本制品使用重组禽类成髓纤维病毒逆转录酶(AMV RTase)，从总RNA或者Poly(A)+ RNA合成第一链cDNA的试剂盒，含有cDNA第一链合成所需的所有试剂。AMV RT具有RNA聚合酶活性和RNase H的活性，能够作用于GC含量高，二级结构复杂的RNA。合成的第一链cDNA可广泛应用于第二链合成、杂交、PCR扩增、Real-time PCR反应等。
产品组成：| 组分 | 10次 | 20次 |
| 5X Reaction Buffer | 50μL | 100μL |
| dNTP Mix (10mmol/L) | 25μL | 50μL |
| Oligo dT Primer (0.5μg/μL) | 15μL | 30μL |
| Random Primer p(dN)6 (0.2μg/μL) | 15μL | 30μL |
| RNase Inhibitor(40U/μL) | 15μL | 30μL |
| AMV Reverse Transcriptase(10U/μL) | 20μL | 40μL |
| RNase free ddH2O | 1mL | 2mL |
保存：-20℃
注意事项：1．RNA样品要避免基因组DNA污染。用于cDNA合成的器具须用0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液37℃浸泡12h；
然后在120℃高压灭菌30min去除残留的DEPC。
2．用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌(180℃，60min)或者上述DEPC处理的器具盛装，使用的无菌水须用0.1%DEPC处理后进行高温高压灭菌。建议RNA实验使用的器具、试剂和无菌水专用。
3．不必从总RNA中分离Poly(A)+ mRNA，但以Poly(A)+ mRNA为模板可以提高终产物得率和纯度。
4．尽管以Oligo dT作引物无需优化，但随机六合引物和RNA的比例对于cDNA合成产物的平均长度非常关键，提高随机六合引物/RNA的比值将导致短链cDNA (500bp)产量升高，而减少此比值则有利于长链cDNA的合成。
5．提高反应温度到50℃有利于解决富含GC二级结构的mRNA问题。AMV RT的热稳定性相对于M-MuLV较好，在37～50℃有较高活性。
6．cDNA产物应置于-20℃保存。
7．在进行实验操作时应将酶放置于冰上，待实验结束后于-20℃保存。
使用方法：1．在冰浴的试管中加入如下反应混合物：
| 成分 | 用量 |
| 模板 | 总RNA | ＜5μg |
| Poly(A)+ RNA | ＜1μg |
| 特异性RNA | ＜0.5μg |
| 引物 | Oligo dT (0.5μg/μl) | 1μL |
| 随机六合引物(0.2μg/μl) |
| 序列特异性引物(20pmol) |
| RNase-free ddH2O | 至11μL |
2．轻轻混匀后离心3~5 s，反应混合物在65℃温浴5min后，冰浴30 s，然后离心3~5 s。
3．将试管冰浴，再加入如下组分：
| 成分 | 用量 |
| 5×Reaction Buffer | 4μL |
| RNase Inhibitor (40U/μL) | 1μL |
| dNTP Mix (10mmol/L) | 2μL |
| AMV Reverse Transcriptase(10U/μL) | 2μL |
注：若5×Reaction Buffer出现白色结晶，需37℃温浴数分钟至白色结晶完全溶解，震荡混匀。
4．轻轻混匀后离心3~5 s。
5．在PCR仪上按下列条件进行反转录反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| cDNA合成 | 42℃ | 30～60min |
| 终止反应 | 85℃ | 5min |
注：
a．如果使用Oligo dT引物或序列特异性引物，进行42℃，30～60min反应；
b．如果使用随机引物，应先进行25℃，10min反应，然后进行42℃，30～60min反应。
c．处理后，置于冰上放置。
- 反转录引物的选择
a．用于第一链cDNA合成的引物，oligo dT有利于长链cDNA的合成，使用该引物只需42℃进行反转录即可，无需25℃预热。
b．随机引物适合于500bp以下的短链cDNA的合成，所转录的RNA模板无需poly(A)尾，可转录5'端区域。使用该引物前须将引物进行25℃温浴。
c．基因特异性引物主要用于合成特定基因片段长度的cDNA。
- 第一链cDNA合成原理及产物检测
a．cDNA的合成是以mRNA为模板，以随机引物或者基因特异性引物或者oligo dT为引物，在反转录酶的催化下从5'→3'合成第一链cDNA。
