本制品是在百奥莱博在"百无忧"细菌DNA提取试剂盒基础上开发的柱式升级产品,可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。
产品特点:1.操作简单,整个过程不到20分钟。
2.产率一般在5~20μg/mL过液培养的饱和菌液(10^8~10^9个细胞)。
3.OD260/280一般在1.8以上,可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4.DNA片段长度一般在40~50 Kb左右。
5.每次提取可以处理0.1~1.5mL的细菌,也可以使用菌落。
6.价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
7.安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。
产品组成:| 组分 | 编号 | 规格 |
| 溶菌酶干粉 | BTN100406 | 600mg |
| 溶液A | BTN60802A | 15mL |
| 溶液B | BTN60802B | 7.5mL |
| 溶液C | BTN60802C | 30mL |
| 离心吸附柱 | BTN60911 | 50套 |
| 通用洗柱液 | BTN60408 | 50mL |
| DNA洗脱液2.0 | BTN111205 | 10mL |
保存:常温(溶菌酶干粉需要4℃或-20℃保存),有效期一年。
自备试剂: 氯仿、自备无菌水
使用方法: 注意:溶液A和溶液B容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分摇匀。
一、对革氏阴性细菌样品,不需用溶菌酶
1.将0.1~1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL塑料离心管中,12000rpm室温离心1分钟沉淀细菌,弃上清。
2.加入300μL预热的溶液A到细菌沉淀中,充分吹打均匀。
3.再加入150μL预热的溶液B到离心管中,颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B比较粘稠,可以采取称量方法取用,150μL约等于150~160mg。也可以将1mL枪头剪去一截再吸取。
4.65℃放置3~5分钟。如果室温放置,DNA产量会降低10~20%。
5.加入200μL自备氯仿,震荡混匀10~30秒,此时溶液将呈乳白色。
6.12000rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中,避免触及中间层的白膜。
7.加入1.5倍体积(约0.7mL)的溶液C,颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中,室温放置至少2分钟。
8.12000rpm室温离心1分钟,DNA将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。
9.将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中,12000rpm室温离心1分钟,弃穿透液。
10.重复上步操作一次。
11.空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL离心管中。
12.加50~100μL通用洗脱液,室温放置3~5分钟。
13.12000rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。
14.由于本制品使用的离心吸附柱吸附DNA的能力较强,可以重复上步操作一次以便得到更多的DNA。
15.直接取5~10μL电泳检测DNA,其余放冰箱备用。
二、对革氏阳性细菌样品,需用溶菌酶
1.将0.1~1.5mL过夜培养的革氏阳性细菌12000rpm室温离心1分钟后,重悬于0.6mL溶菌液中(溶菌液配制:30mL无菌水+600mg溶菌酶,配制后最好分装成小管并放-20℃长期保存,每次只用一小管),颠倒混匀5~10次后放37℃保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间,需要自己根据不同的细菌摸索)。
2.12000rpm室温离心10分钟,小心弃上清。
3.后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。
三、其他注意事项
1.可以直接使用细菌菌落提取DNA,操作时直接将细菌菌落挑入到溶液A中,后续操作同上。
2.从单个菌落中提取到的DNA较少,所以只用30μL通用洗脱液洗脱。
使用效果: 
图注:用本制品提取1.0mL过夜培养的E.coli Tg1细菌,DNA最后溶于100μL TE中,取20μL上样。M表示全长的DNA,其余均为提取的样品DNA。