尿嘧啶DNA糖基酶(UDG/UNG) 产品官方链接

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2024-06-20 14:12

北京百奥莱博科技有限公司

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王欣
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产品属性
货号MT0111
规格1000U|5000U
产品说明
本产品为来源于E.coli uracil N-glycosylase基因的重组表达蛋白,分子量为26kDa。它可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,但对RNA无活性。UNG主要应用于PCR扩增产物的防污染,作用原理基为:如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中,形成了含dU碱基的PCR扩增产物,该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U基的糖苷键,降解该PCR扩增产物。

产品应用:
1.去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基。
2.去除PCR残存污染。


单位定义:
在标准PCR反应体系下,37℃条件下,1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为一个活性单位。

产品组成:
组分1000U5000U
Uracil N-Glycosylase(5U/μL)200μL1mL
说明书1份1份

保存:-20℃,避免反复冻融,有效期2年。

酶贮存液:
20mM Tris-HCl,50mM NaCl,1mM DTT,50% Glycerol,0.1% (w/v) Triton X-100,pH7.5。

酶兼容性:
Uracil DNA Glycosylase (UNG)与绝大多数的PCR聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。

酶热失活:
95℃加热5分钟。

活性测试:
核酸外切酶III使用效果图
取1μg dUTP PCR产物,用UNG 37℃消化30min后进行琼脂糖凝胶电泳。
泳道1:对照(不加UNG酶);
泳道2-7:分别为2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37℃消化30min后的PCR产物;
M:DNA Marker 2000(MT0038)

性能测试:
核酸外切酶III使用效果图
UNG在标准PCR体系下(50μL体系)性能测试。处理方法为:在反应体系中分别加入不同量的UNG(如图所示),50度2min,95度5min,然后进入PCR循环扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
泳道1-3:标准dNTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;
泳道4-6:dNTP/dUTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;
M:DNA Marker 10000(MT0039)

使用方法:
1.配制反应体系
成分用量
Strong Taq DNA Polymerase0.5μL
dNTP/dUTP Mixture2~4μL
10×Hi PCR Buffer5μL
Uracil N-Glycosylase(5U/μl)0.2~0.5μL
Primers (10μM each)1μL
Template DNA10ng~1μg
DEPC-treated Water至50μL

2.PCR循环参数设置
循环数/过程温度时间
去污染50℃2min
热失活95℃5min
30~4095℃20s
50~60℃20s
72℃1kb/min
Last Cycle72℃5min


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