本产品为来源于E.coli uracil N-glycosylase基因的重组表达蛋白,分子量为26kDa。它可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,但对RNA无活性。UNG主要应用于PCR扩增产物的防污染,作用原理基为:如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中,形成了含dU碱基的PCR扩增产物,该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U基的糖苷键,降解该PCR扩增产物。
产品应用:1.去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基。
2.去除PCR残存污染。
单位定义: 在标准PCR反应体系下,37℃条件下,1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为一个活性单位。
产品组成:| 组分 | 1000U | 5000U |
| Uracil N-Glycosylase(5U/μL) | 200μL | 1mL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存:-20℃,避免反复冻融,有效期2年。
酶贮存液: 20mM Tris-HCl,50mM NaCl,1mM DTT,50% Glycerol,0.1% (w/v) Triton X-100,pH7.5。
酶兼容性: Uracil DNA Glycosylase (UNG)与绝大多数的PCR聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。
酶热失活: 95℃加热5分钟。
活性测试: 
取1μg dUTP PCR产物,用UNG 37℃消化30min后进行琼脂糖凝胶电泳。
泳道1:对照(不加UNG酶);
泳道2-7:分别为2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37℃消化30min后的PCR产物;
M:
DNA Marker 2000(MT0038) 性能测试: 
UNG在标准PCR体系下(50μL体系)性能测试。处理方法为:在反应体系中分别加入不同量的UNG(如图所示),50度2min,95度5min,然后进入PCR循环扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
泳道1-3:标准dNTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;
泳道4-6:dNTP/dUTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;
M:
DNA Marker 10000(MT0039) 使用方法:1.
配制反应体系| 成分 | 用量 |
| Strong Taq DNA Polymerase | 0.5μL |
| dNTP/dUTP Mixture | 2~4μL |
| 10×Hi PCR Buffer | 5μL |
| Uracil N-Glycosylase(5U/μl) | 0.2~0.5μL |
| Primers (10μM each) | 1μL |
| Template DNA | 10ng~1μg |
| DEPC-treated Water | 至50μL |
2.
PCR循环参数设置| 循环数/过程 | 温度 | 时间 |
| 去污染 | 50℃ | 2min |
| 热失活 | 95℃ | 5min |
| 30~40 | 95℃ | 20s |
| 50~60℃ | 20s |
| 72℃ | 1kb/min |
| Last Cycle | 72℃ | 5min |
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