本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统,从干血斑中分离纯化高质量基因组DNA。独特包埋的磁珠,在一定条件下对核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、便捷,提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠,尤其适合高通量工作站的自动化提取。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
储存条件:室温(15~25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2~8℃。2~8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中孵育10min,以溶解沉淀。
1.样本处理:向1.5mL离心管中加入3~10片直径为3mm的干血斑样品,加入200~400μL的缓冲液GAS和15μL Proteinase K溶液。
| 干血斑片数 | 缓冲液GAS |
| 3片 | 200μL |
| 5片 | 300μL |
| 10片 | 400μL |
2.涡旋震荡10sec混匀后,放入预热至75℃的恒温震荡器中,900rpm恒温震荡裂解45min。
注意:当样本数目比较大时,可以将缓冲液GAS和Proteinase K按比例预先混合,混合后放置不要超过1h。
3.在上一步样品裂解期间,向新的离心管中加入10μL磁珠悬浮液G,600μL缓冲液GHC(使用前请确认是否已加入异丙醇),抽打混匀或振荡混匀10sec。
注意:当样本数目比较大时,可以将磁珠悬浮液G,缓冲液GHC按比例预先混合并抽打或振荡混匀20sec,混合后每个样本用量为610μL。
4.样品裂解后,将步骤2中离心管短暂离心后室温放置2min,并将裂解液上清转移至步骤3中的离心管,然后将其放入恒温振荡器,室温900rpm震荡10min。
注意:尽量不要吸到滤纸片,否则会影响到磁珠与核酸结合,导致得率降低。
5.将离心管放置于磁力架上静置1min,待磁珠完全吸附时小心去除液体。
6.将离心管从磁力架上取下,加入900μL去蛋白液PD,抽打混匀或振荡混匀2min。
7.将离心管放置于磁力架上静置1min,待磁珠完全吸附时小心去除液体。
8.将离心管从磁力架上取下,加入900μL去蛋白液PD,抽打混匀或振荡混匀2min。
9.将离心管放置于磁力架上静置1min,待磁珠完全吸附后小心去除液体。
10.将离心管从磁力架上取下,加入900μL漂洗液PWB(使用前请确认是否已加入无水乙醇),抽打混匀或振荡混匀2min。
11.将离心管放置于磁力架上静置1min,待磁珠完全吸附后小心去除液体。将离心管放置于磁力架上静置30sec,磁珠完全吸附后,小心吸去液体。
12.将离心管于磁力架上,室温晾干10~15min。
注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间,以免难以洗脱DNA。
13.加入30~50μL洗脱缓冲液TBC或去离子水,抽打混匀或振荡混匀,置于56℃,孵育5~10min。
14.将离心管放置于磁力架上静置2min,待磁珠完全吸附时小心将DNA溶液转移至新的离心管,并于适当条件保存。