1．无菌的解剖剪将实体组织剪成2～3mm3小块(至少0.5～1cm3)或糊糜状；
2．加入适量漂洗液漂洗三次，每次尽量除去漂洗液；
3．用稀释液将消化酶A稀释成一定浓度的消化酶A工作液，在组织中加入适量的消化酶A工作液消化，加入量以组织块完全没入为宜，37℃消化若干分钟至数小时；
注：不同组织或细胞类型所用消化酶A工作液浓度、消化时间及温度均不尽相同，请参考表1。
4．选作步骤：对于较难消化的硬组织或上述消化液A过滤后的残块可进行二次消化或多次消化，每次加入与消化酶A工作液等体积的消化液B，37℃消化20～60分钟；
5．静置后小心弃去消化液上清，轻轻加入少许清洗液(可加入0.25%小牛血清)漂洗三次；
6．机械分散，用吸管吹打或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使组织分散，用100～200目不锈钢网或铜网或尼龙网(细胞筛)研磨过滤；
7．吸上述滤液，1500 r/min离心2min，弃上清。沉积细胞加入适量清洗液同样清洗、离心三次；
8．沉淀加入适宜的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，显微镜计数后，进行进一步接种培养或其它研究。

1．肝细胞
实验动物以乙醚麻醉，无菌操作下开腹，暴露门静脉与下腔静脉，行门静脉穿刺，用预温37℃的漂洗液进行原位灌注。待肝脏充盈后剪开下腔静脉，放尽积血积液后用血管钳关闭血管。如此反复灌注20min，至肝脏表面湿润变软，呈现黄白色时停止，用消化酶A工作液(终浓度3mg/mL)灌注保留10～20min，取下肝脏置培养皿中，剪成乳糜状，37℃消化30min，用适量的清洗液(可事先加入0.25%的小牛血清)清洗后，200目滤网研磨过滤，吸取滤液，500 r/min离心2min，弃上清。沉积的细胞再以同样条件清洗、离心2～3次。最后以RPMI-1640制成细胞悬液备用。
2．内皮细胞
内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞，研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便，产后新鲜脐带，无菌剪取10—15厘米长一段，用三通注射器吸取温漂洗液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线绳扎紧，以防液体返流。用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入消化酶A工作液(终浓度为5mg/mL)，充满血管，消化3～10min；注入口用线绳扎，以防液体返流。吸出含有内皮细胞的消化液，于离心管中，注入温清洗液轻轻反复冲洗后，一并注入离心管中(此步骤可重复)。离心去上清，加培养液制成细胞悬液，接种培养。
3．心肌细胞
大鼠常规方法开胸，行胸主动脉插管，Langendorff离体心脏灌流装置用漂洗液逆灌，恒温37℃灌注10～15分钟直至心脏停跳，用消化酶A工作液(终浓度5mg/mL)灌注约20min，停灌后剪下左右心室，剪成1.5mm3左右的小块，置于细胞分离钢网筛(60目)研磨过滤，滤液离心(700 r/min离心1min，沉淀用清洗液与适当培养液(3∶1)的混合液离心洗涤4～5次，悬液再悬浮于3%-6%BSA上梯度离心(700 r/min离心1min，二次)，沉淀含有10%小牛血清的培养液重悬，接种培养。