T Vector

2X Rapid Ligation Buffer

50% PEG 4000

T4 DNA Ligase, 5 U/pl

Sterilized ddH2O

操作手册

5 pg

500 pl

100 pl

500 U

1 ml 1 份

保存方法及注意事项

该产品低温运输， -20°C 保存，有效期见包装。

产品介绍

本试剂盒适用于克隆带有 3’ -末端 A 突出的   PCR 产物的克隆。如 Taq   DNA 聚合酶、 Tth   DNA 聚合酶等扩增的 PCR   产 物在 3’-末端后都带有一个突出的碱基 A，这样的 PCR 产物可以用 3’-末端后带有一个突出碱基 T 的载体方便地进行克隆。

为了获得快速高效的连接效果，本试剂盒采用了一种特殊的高活力   Rapid Ligation Buffer，确保在短时间内可以获得很好 的连接效果。独特连接系统允许用户在 10 分钟的时间里完成连接反应。连接产物可以用 M13 通用引物和 T7 启动子引物对 PCR 产物进行测序。T Vector 含有 T7 RNA 聚合酶的启动子，可以对插入片段进行体外转录。

实验准备

1.     PCR产物3’末端带有突出的A碱基： Taq 、Tth 、AmpliTaq 、KlenTaq DNA聚合酶扩增的PCR产物3’末端均带有突出的A 碱基。 建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收，再进行连接转化实验，可以使用联迈生物产品柱式DNA胶回收试 剂盒 () 。如果PCR扩增产物特异性很高，可直接使用联迈生物产品柱式PCR产物纯化试剂盒纯化 PCR产物。

2.     PCR产物3’末端没有突出的A碱基： Pfu 、Pwo、Tli或DeepVent 等DNA聚合酶具有3’   5’外切酶活性，其扩增的PCR产 物末端可能不带有3’ A，要对这种平末端PCR产物进行克隆， 应先对其进行3’末端加A，再进行连接转化实验。建议选用 联迈生物产品dA-Tailing Kit   进行加A实验。

3.      自备试剂： SOC培养基、IPTG)、X-gal)  等。

标准操作步骤

1.     在0.2 ml PCR管中配制下列连接体系：