柱式血液基因组DNA提取试剂盒 产品官方链接

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百奥莱博
北京
2024-06-20 14:12

北京百奥莱博科技有限公司

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王欣
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北京百奥莱博科技有限公司
产品属性
货号GS0066
规格50次|100次
产品说明

本制品对经典血液基因组DNA提取方法进行了改良,使用高浓度的蛋白变性剂,当血液体积≤200μL时,无需红细胞裂解,简化了操作流程,大大缩短了裂解的时间。从200μL含无核红细胞的血液样品可以获得1~3μg DNA。


处理大量血液样品时(>200μL),需先用红细胞裂解液(Buffer TBP)处理,可一次获得大量血液基因组DNA,OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。



产品组成:
组分50次100次
PBS Solution10mL20mL
Buffer DL12mL24mL
GW Solution30mL60mL
Wash Solution (concentrate)24mL2×24mL
CE Buffer (pH9.0)15mL30mL
Buffer TBP (optional)50mL100mL
Proteinase K1.2mL2.4mL
吸附柱及收集管50套100套

保存:室温

注意事项:
1.该试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方,方便使用,而且非常稳定,可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响,如需进一步延长保存期限,请置4℃保存。
2.Buffer DL、Buffer TBP中含有刺激性化合物,操作过程中应避免直接接触,如沾染皮肤或眼睛请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。


准备工作:
1.自备材料:水浴锅、小型高速离心机(最大离心力≥ 12000×g)、1.5mL离心管、无水乙醇、RNase A (10mg/mL)等。
2.试剂盒初次开启,按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇,混匀后在瓶身做好标记,于室温密封保存(24mL Wash Solution中加入96mL无水乙醇)。
3.每次使用前请检查Buffer DL是否出现沉淀,如有沉淀,请于56℃溶解沉淀后使用。


提取步骤:
1.样品处理
a.含无核红细胞的血液样品(如人血液):血液用量≤200μL时,取无核红细胞的血液样品加入到1.5mL离心管中,再加入PBS Solution使总体积为200μL,混匀。
·血液用ACD(0.48% Citric Acid,1.23% Sodium Citrate,1.47% Glucose)或EDTA(pH8.0)抗凝。
·血液用量>200μL时,加入2倍体积的Buffer TBP,充分混匀,室温放置1min,直至红血球完全裂解。8000rpm,离心1min,弃上清。用500μL TE Buffer重悬沉淀,8000rpm,离心1min,弃上清,可再用TE Buffer洗涤一次至沉淀为白色,再加入200μL PBS solution,继续步骤2。
b.含有核红细胞的血液(如家禽血液):取5~10μL含有核红细胞的血液加入到1.5mL离心管中,再加入PBS Solution使总体积为200μL,混匀。
c.凝固血块:取0.1g凝固血块,用液氮充分研磨,再加入200μL PBS Solution,混匀。
2.加入20μL Proteinase K,混匀。再加入200μL Buffer DL,震荡混匀,56℃水浴10min。
·混合液变澄清透明为裂解完全。如溶液未变澄清,说明细胞裂解不彻底,应适当延长水浴时间,否则将可能降低DNA的得率或导致提取的DNA不纯。
·如需得到无RNA的DNA,可在水浴后加入20μL的RNase A(10mg/mL),室温放置2~5min。
·血液样品超过500μL时,可适当增加Proteinase K和裂解液的用量并延长水浴时间。
3.向上述离心管中加入200μL的无水乙醇,充分颠倒混匀。
·加入无水乙醇后可能会产生半透明纤维状悬浮物,不影响DNA的提取和应用。
4.将吸附柱放入收集管中,用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中,静置2min,再10000rpm室温离心1min,倒掉收集管中废液。
5.将吸附柱放回收集管中,向吸附柱中加入500μL GW Solution,10000rpm离心30 s倒掉废液。
6.将吸附柱放回收集管中,向吸附柱中加入700μL Wash Solution,10000rpm离心30 s倒掉废液。
·使用前注意溶液中是否按比例加入无水乙醇。
7.重复步骤6一次。
8.将吸附柱重新放回收集管中,于12000rpm室温离心2min,离去残留的Wash Solution。
·将吸附柱盖子打开于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残留的Wash Solution,Wash Solution的残留会影响基因组DNA的产量和后续的实验。
9.取出吸附柱,放入一个新的1.5mL离心管中,加入50μL CE Buffer静置3min,12000rpm室温离心2min,收集DNA溶液。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
·如果想提高DNA的得率,可重复步骤9或将CE Buffer 60℃预热。