Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的单链或双链DNA，但不能水解RNA或含有dU的长度不超过6个碱基DNA寡聚体。
UDG酶主要应用于消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题。其防止污染的原理为：在PCR反应中加入适量的dUTP，以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成含dU碱基的PCR扩增产物；后续进行PCR反应时，使用UDG酶选择性切割可能被污染而带入的之前PCR扩增产生的含有dU的单链或双链DNA，从而避免之前的PCR扩增产物可能的污染对于本次PCR扩增带来的负面影响。
产品用途：● 防止PCR产物的交叉污染；
● 单核苷酸多态性检测(single nucleotide polymorphism detection，GMPD)；
● 位点特异性突变；
● 蛋白质与DNA相互作用研究；
● SNP基因分型；
● PCR产物的克隆；
● 制备含有单链突出末端的PCR产物或cDNA。
产品组成：| 组分 | 1000U | 5000U |
| E.coli UDG (5U/μL) | 200μL | 1mL |
| 10×E.coli UDG Buffer | 2mL | 10mL |
保存：-20℃，有效期1年。
酶储溶液： 10mM Tris-HCl (pH7.4),50mM KCl,0.1mM EDTA,1mM DTT,0.1mg/ml BSA,50% (v/v) glycerol。
活性定义： One unit is defined as the amount of enzyme that catalyzes the release of 60pmol of uracil per minute from double-stranded,uracilcontaining DNA.Activity is measured by release of [3H]-uracil in a 50μL reaction containing 0.2μg DNA (10
4～10
5 cpm/μg) in 30minutes at 37℃.
缓冲体系： 10×E.coli UDG Buffer：
200mM Tris-HCl,10mM EDTA,10mM DTT,pH8.0 at 25℃。
产品来源： 大肠杆菌重组、表达和纯化而获得。
质量控制： 不含UDG酶活力之外的内切或外切脱氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。
失活抑制： 95℃加热10分钟可以使95% E.coli UDG失活。由于经95℃加热10分钟处理后，其仍保持部分活性，建议加入UDG抑制剂(如来自枯草芽孢杆菌噬菌体PBS2的Ugi蛋白或噬菌体phi29的p56蛋白)进一步抑制其酶活以免其继续降解含有dU的PCR产物。
注意事项：1．E.coli UDG酶在大多数PCR反应缓冲液体系中均有活性，但对于自行使用的PCR或RT-PCR体系，首次使用时建议先测试一下是否和所使用的体系兼容。通常取含dUTP的PCR扩增产物，参考图1加入适量UDG，观察能否有效降解含dUTP的PCR扩增产物。
2．E.coli UDG酶消化产生的DNA链的无碱基位点可通过加热，碱处理或核酸内切核酸酶处理而除去。通常PCR反应过程中的加热步骤可以确保UDG酶消化的位点被完全剪切开。
3．E.coli UDG酶在比较宽泛的pH范围内具有活性，其最适pH值为8.0，E.coli UDG酶活不需要二价阳离子，并被高离子强度(> 200mM)所抑制。
4．E.coli UDG酶可以在PCR反应前清除不慎污染的含dUTP的PCR产物，从而避免由于污染导致的PCR假阳性结果。
5．E.coli UDG在加热变性后可能由于重折叠而在较低温度下表现出残留活性。因此，建议在退火步骤中使用55℃或更高的温度进行后续PCR。
6．E.coli UDG可以用于DNA或cDNA的常规PCR或qPCR扩增体系，但通常不建议用于RT-PCR体系。因为在反转录条件下，通常E.coli UDG会保持活性，并可能消化新合成的cDNA。
7．E.coli UDG酶经95℃加热10min处理后，仍会保持少量活性，如果希望用于RT-PCR体系，需要反转录和PCR分开进行，在反转录时不使用dUTP，在反转录后加入E.coli UDG酶处理，然后进行常规的PCR或qPCR，或者建议加入UDG抑制剂(如来自枯草芽孢杆菌噬菌体PBS2的Ugi蛋白或噬菌体phi29的p56蛋白)进一步抑制E.coli UDG的酶活性。
使用说明：1．参考下表设置PCR反应体系，或者参考所使用的PCR扩增体系设置PCR体系，并加入E.coli UDG酶至终浓度为0.01U/μl。通常仅加入PCR buffer即可，无需加入UDG的buffer。
| 成分 | 25μL体系 | 50μL体系 | 终浓度 |
| Nuclease-Free Water | (18.325-x)μL | (36.65-y)μL | - |
| 10×PCR Buffer (with Mg2+) | 2.5μL | 5μL | 1X (1.5mM Mg2+) |
| dNTP/dUTP (2.5mM each/5mM) | 2μL | 4μL | 0.2mM each/0.4mM |
| Primer mix (10μM each) | 2μL | 4μL | 0.8μM |
| Template | xμL | yμL | 10pg～1μg |
| Taq DNA Polymerase (5U/μl) | 0.125μL | 0.25μL | - |
| E.coli UDG (5U/μL) | 0.05μL | 0.1μL | - |
| 总体积 | 25μL | 50μL | - |
注意：
a．根据实验需要，dNTP/dUTP的终浓度可在0.2～0.6mM之间调整。镁离子的最终终浓度可在1.0～4.0mM之间调整。
b．对于25μL的PCR反应体系，E.coli UDG (5U/μl)的使用量一般为0.25～0.5U。
c．模板和引物的用量请参考Taq DNA Polymerase使用说明或相应的PCR体系的产品说明书。
2．参考上述反应体系，加入E.coli UDG后混匀，37℃孵育10min (本步骤可以有效去除可能的之前含dUTP的PCR扩增产物的污染)，后续就可以立即进入PCR扩增程序(须确保退火温度不低于55℃)。根据我们的实际测试结果发现，在退火温度不低于55℃的情况下，使用本产品的情况下不会影响PCR扩增的产物量。
