DNase I(来源于牛胰腺) 产品官方链接

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2024-06-20 14:12

北京百奥莱博科技有限公司

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王欣
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产品属性
货号SY0270
规格15KU|10×15KU
产品说明

本品来自牛胰腺,由四种色谱区分的组分A,B,C,D构成,摩尔比为4:1:1,而D组分非常少。分子生物学实验中常用于清除蛋白中的DNA,或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以含氯化钙的冻干粉形式供应,



背景资料:
DNase I一种发现于多种细胞和组织的核酸酶,属核酸内切酶,靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键,产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸,平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA,如单链DNA、双链DNA,甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。最佳的工作范围是pH7~8,DNase的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下,该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点;而在Mn2+存在的条件下,可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从牛胰腺中分离而来,至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。

基本信息:
CAS:9003-98-9
分子量:~31kDa
酶活力:≥2000 Kunitz Units/mg蛋白
类型:Type IV
最佳PH:7~8
外观:白色至浅褐色冻干粉
纯度:≥80% by Biuret
溶解性:0.15M NaCl(5mg/mL),无色透明溶液
抑制剂:β-巯基乙醇;螯合剂;SDS;肌动蛋白

产品组成:
组分15KU10×15KU
DNase I(来源于牛胰腺)15KU10×15KU
说明书1份1份

保存:-20℃,有效期2年。

单位定义:
25℃,pH5.0条件下DNase催化底物DNA,使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位(Kunitz unit)。

失活抑制:
加入EDTA至终浓度为2.5mM后,65℃加热10min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子,0.1%的SDS,DTT、巯基乙醇等还原剂,50~100mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

使用方法:
应用于蛋白提取实验:
1.反应体系:蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液(使其终浓度为20U/mL),1/100体积加入1M MgCl2
2.反应条件:37℃,30~60min。继续后续蛋白提取实验即可。
注:由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca2+和Mg2+,蛋白初始裂解液中要去除EDTA,否则会降低DNase I的消化能力。