染料DiD,DiI,DiO和DiR是一类亲脂性荧光染料家族，用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱)结合时，其荧光强度显著增强。它们具有很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，导致在其最佳浓度条件下，将整个细胞膜染色。它们不同的荧光颜色：DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光)，为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。
DiD(红色荧光)可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD可以用633nm He–Ne激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。
基本信息：| 英文名称 | DiD Perchlorate |
| 光谱特性 | Ex/Em=644nm/663nm |
| 分子式 | C61H99ClN2O4 |
| 分子量 | 959.91 |
| 结构式 |  |
| 纯度 | ＞95% |
| 外观 | 红色或紫色或深蓝色固体 |
| 溶解性 | 溶于DMSO |
| 储存条件 | -20℃，避光防潮密闭干燥 |
应用实例： 本品配成5mM溶液后为深蓝色液体溶液澄清度且颜色检测无可见异物；然后进行荧光染色检测
工作条件：荧光显微镜，C6细胞，400×，工作浓度5μM
经细胞膜荧光染色，在40倍物镜下可看到清晰荧光。此浓度下在荧光显微镜下看到的荧光亮度亦足以用于共聚焦检测。
操作说明：A．
染色液制备1．配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。
注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
2．工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5μM的工作液。
注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
B．
悬浮细胞染色1．加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
2．37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
3．孵育结束，按1000～1500rpm离心5min。
4．倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
5．重复3、4步骤两次以上。
C．
贴壁细胞的染色 1．将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
2．从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
3．在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4．37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
5．吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
D．
显微镜检测 DiD，DiO，DiI，DiR滤光器的选择参见表1。DiD染色可见红色荧光。
E．
流式细胞仪检测 DiO、DiI、DiD、DiR染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。
