本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl
2、反应缓冲液、染料、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可最大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。适用于常规PCR反应、复杂模板(如GC含量高,有二级结构)的扩增以及大规模基因检测。使用该产品得到的PCR扩增产物末端含有一个A碱基,可以直接用于TA克隆。
产品组成:| 组分 | 20×50μL | 100×50μL |
| 2×Taq PCR MasterMix(含染料) | 500μL | 5×500μL |
| 说明书 | 1份 |
保存:-20℃可长期保存;4℃稳定保存3个月。经常使用时,一旦融化后请4℃贮存,尽量避免反复冻融。
质量控制: 经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余基因组DNA;能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
使用方法:1.冰浴中彻底融化2×Taq PCR MasterMix,混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2.按照下表在0.2mL PCR管中制备50μL反应体系:
| 成分 | 用量 | 终浓度 |
| 2×Taq PCR MasterMix | 25μL | 1× |
| 上游引物(10μM) | 1~5μL | 0.2~0.8μM |
| 下游引物(10μM) | 1~5μL | 0.2~0.8μM |
| 模板 | x μL | 10pg~1μg |
| 水 | 至50μL | |
3.快甩离心将反应液收集到管底。
4.PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μL矿物油。
5.PCR仪上执行以下程序:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 初始变性 | 94℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30sec | 25-40* |
| 退火 | Tm-5℃* | 30sec |
| 延伸 | 72℃ | 1min/kb |
| 最后延伸 | 72℃ | 5min | 1 |
注
*:PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
6.电泳检测
注:使用含染料的2×Taq PCR MasterMix(货号:
RFT295)可以直接上样;不含染料的2×Taq PCR MasterMix(货号:
RFT095)要与6×loading buffer混合后上样。