本试剂盒采用比色法测定血清、组织、细胞、发酵液、培养液等样品中的乳酸含量。
检测原理： 以NAD
+为氢受体，LDH催化乳酸(Lactic Acid)脱氢产生丙酮酸，使NAD
+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。
背景资料： 乳酸是糖无氧氧化(糖酵解)的代谢产物。乳酸产生于骨胳，肌肉，脑和红细胞。经肝脏代谢后由肾分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及灌注量不足。乳酸水平的增高可见于多种临床疾病。
产品特点：● 快速简便：全程约30分钟，可测50例左右样本。
● 取样量微：本法取样量20μL～50μL即可
● 稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
● 再现性好：变异系数CV=1.7%。
● 回收试验：X =100%。
● 受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
● 测试面广：可测动物血清(浆)、组织、发酵液、培养细胞、培养细胞上清、红细胞等。
产品组成：| 组分 | 规格 | 保存 |
| 试剂一：酶稀释液 | 60mL | 2～8℃可保存6个月 |
| 试剂二：酶储备液 | 0.6mL | 2～8℃可保存6个月 |
| 试剂三：黄色透明液体 | 2×6mL | 2～8℃避光可保存6个月 |
| 试剂四：粉剂 | 2支 | 4～8℃可保存1个月，长期保存请置于-20℃ |
| 试剂五：终止液 | 2×60mL | 2～8℃可保存6个月 |
| 试剂六：标准品(3mmol/L) | 2mL | 2～8℃可保存6个月 |
自备器材：1．721或722等可见光分光光度计（有对应波长的酶标仪或半自动生化分析仪）
2．37℃恒温水浴箱或气浴箱
3．漩涡混匀器
4．微量移液器
注意事项：1．血清、血浆、组织块置于冰箱-20℃冷冻，可保存1个月左右；-70℃冷冻可保存2～3个月。温度越低保存时间越长。解冻后的样本或组织匀浆必须当天测定。
2．严重溶血及黄疸会使得测定结果偏高。
3．在批量实验前需要进行预实验，以确定绝对OD(测定OD值—空白OD值)在0.05～0.35之间。如果测定绝对OD小于0.05，则需要加大样本浓度重新测定；如果测定绝对OD大于0.35，则需要将样本稀释后重新测定。
4．本试剂盒也可用酶标仪读数：波长530nm，去反应液250μL，酶标仪读数即可。
试剂配制：● 酶工作液：临用前将试剂二（酶储备液）和试剂一（酶稀释液）按照1︰100的体积比进行混合，现用现配，2～8℃保存24小时内有效。
● 显色剂：使用前取试剂四粉剂1支倒入1瓶试剂三液体中，待粉剂全部溶解后，用微量移液器取少许液体打入小离心管中，反复颠倒离心管，再用微量移液器将离心管中的液体转移到瓶中，如此反复2～3次，使二者充分混合，配成显色剂，2～8℃避光保存2周内有效。
样本处理：● 血清、血浆、培养液等样本
取血清(浆)、培养液用生理盐水稀释成不同浓度，按操作表做预实验，选择绝对OD值(测定OD值—空白OD值)在0.05～0.35之间的浓度为最佳取样浓度。
● 动物组织样本
组织样本准确称取质量，按样本质量(g):生理盐水体积=1:9的比例混合，冰水浴条件下，2500转/分机械匀浆10分钟，取上清液（10%匀浆上清）进行测定。将10%匀浆上清用生理盐水稀释成不同浓度，按操作表做预实验，选择绝对OD值(测定OD值—空白OD值)在0.05～0.35之间的浓度为最佳取样浓度。
● 培养细胞、细菌、植物组织
常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
操作流程：1．按步骤加入样本、酶工作液、显色剂。
2．漩涡混匀，37℃孵育10分钟。
3．加入终止剂终止反应。
4．530nm波长，1cm光径，比色。
操作步骤： 按下表加入各成分并进行相应操作：
| 成分 | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
| 双蒸水（ml） | 0.02 | | |
| 3mmol/L标准品（ml） | | 0.02 | |
| 待测样本（ml） | | | 0.02 |
| 酶工作液（ml） | 1 | 1 | 1 |
| 显色剂（ml） | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 混匀，37℃水浴准确反应10分钟 |
| 终止液（ml） | 2 | 2 | 2 |
| 混匀，波长530nm，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。 |
计算公式：●
血清、血浆、培养液等样本 | 乳酸含量 | ＝ | OD测定—OD空白 | × | 标准品浓度 | ×样本测试前稀释倍数 |
| (mmol/L) | OD标准—OD空白 | (3mmol/L) |
●
组织样本 | 组织乳酸含量 | ＝ | OD测定—OD空白 | × | 标准品浓度 | ÷ | 待测样本蛋白浓度 |
| (mmol/gprot) | OD标准—OD空白 | (3mmol/L) | (gprot/L) |
注：prot为蛋白的意思
1．用生理盐水按1:1比例2倍稀释血清，取0.02mL按步骤操作，测得空白管OD值为0.076，标准管吸光度值为0.384，测定管吸光度值为0.304，计算如下：
| 乳酸含量 | ＝ | OD测定—OD空白 | × | 标准品浓度 | ×样本测试前稀释倍数 |
| (mmol/L) | OD标准—OD空白 | (3mmol/L) |
|
| ＝ | 0.304—0.076 | ×3×2＝4.442mmol/L |
| 0.384—0.076 |
2．用生理盐水按4:1比例5倍稀释培养液，取0.02mL按步骤操作，测得空白管OD值为0.076，标准管吸光度值为0.384，测定管吸光度值为0.193，计算如下：
| 乳酸含量 | ＝ | OD测定—OD空白 | × | 标准品浓度 | ×样本测试前稀释倍数 |
| (mmol/L) | OD标准—OD空白 | (3mmol/L) |
|
| ＝ | 0.193—0.076 | ×3×5＝5.698mmol/L |
| 0.384—0.076 |
3．取5%的小鼠肝组织匀浆液0.02mL，按步骤操作，测得空白管OD值为0.076，标准管吸光度值为0.384，测定管吸光度值为0.357。同时测得5%肝组织匀浆蛋白浓度为7.006gprot/L，计算如下：
| 组织乳酸含量 | ＝ | OD测定—OD空白 | × | 标准品浓度 | ÷ | 待测样本蛋白浓度 |
| (mmol/gprot) | OD标准—OD空白 | (3mmol/L) | (gprot/L) |
|
| ＝ | 0.357—0.076 | ×3÷7.006＝0.391mmol/gprot |
| 0.384—0.076 |
4．取2%的猪肌肉组织匀浆液0.02mL，按步骤操作，测得空白管OD值为0.076，标准管吸光度值为0.384，测定管吸光度值为0.154。同时测得2%肌肉组织匀浆蛋白浓度为1.1019gprot/L，计算如下：
| 组织乳酸含量 | ＝ | OD测定—OD空白 | × | 标准品浓度 | ÷ | 待测样本蛋白浓度 |
| (mmol/gprot) | OD标准—OD空白 | (3mmol/L) | (gprot/L) |
|
| ＝ | 0.154—0.076 | ×3÷1.019＝0.746mmol/gprot |
| 0.384—0.076 |
