本试剂盒包含完成PCR反应所需全部试剂,可进行PCR实验的教学和科研。其中模板为质粒DNA;引物为根据质粒DNA序列设计的上、下游引物;2×Taq PCR MasterMix包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可最大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。使用本试剂盒进行PCR反应后,PCR产物大小应为2000bp。
1.冰浴中彻底融化模板,引物和2×Taq PCR MasterMix,混匀后快甩离心将溶液收集到管底。
2.按照下表在0.2mL PCR管中制备反应体系:
| 成分 | 50μL反应体系用量 |
| 上游引物(2000FW) 10μM | 1μL |
| 下游引物(2000RV) 10μM | 1μL |
| 模板 | 1μL |
| 2×Taq PCR MasterMix | 25μL |
| 水 | 22μL |
3.快甩离心将反应液收集到管底。
4.PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μL矿物油。
5.PCR仪上执行以下程序:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 初始变性 | 94℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30sec | 30 |
| 退火 | 54℃ | 30sec |
| 延伸 | 72℃ | 2min |
| 最后延伸 | 72℃ | 5min | 1 |
6.反应完成后,取5mL反应液,1%琼脂糖凝胶电泳,观察条带情况。