本产品基于PCR技术,采用人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒特异性引物扩增,对扩增产物进行电泳检测。
背景资料: 人类嗜T淋巴细胞病毒(Human T-cell Lymphoma Virus,HTLV)是一种致瘤性RNA病毒,属慢病毒亚科,可分为Ⅰ型和Ⅱ型。近来发现该病毒在人类可引起多种疾病:Ⅰ型可引起成人T细胞白血病/淋巴瘤、热带痉挛性截瘫以及其他具有相关性的脊髓病等;Ⅱ型与T-多毛细胞/巨粒细胞白血病等疾病相关,两类病毒都会对人体健康造成严重损害,因此检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒DNA具有重要意义。
产品特点:1.即开即用,用户只需要提供病毒DNA模板。
2.引物经过精心优化,专一性强,只扩增人类嗜T淋巴细胞病毒(包括I型和II型)前病毒DNA,与其他病毒没有交叉反应。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5.本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次,但只能用于科研。
产品组成:| 组分 | 规格 |
| PCR MagicMix 3.0 | 1mL |
| 超纯水 | 1mL |
| HTLV前病毒通用PCR引物混合液 | 100μL |
| HTLV前病毒通用PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
| 核酸释放剂 | 20次(1mL) |
保存:-20℃,有效期一年。
注:人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒通用PCR阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
使用方法: 一、样品DNA的制备1.用自选方法纯化N+2个样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20次核酸释放剂试用装。
2.如果有N个样品,则需要做N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在200μL水中加10μL人类嗜T淋巴细胞病毒PCR阳性对照的10000倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用200μL水。提取结束后最后得到200μL模板DNA(每个样品)放冰上待用,溶解DNA沉淀的溶液不能少于200μL,否则PCR抑制物很可能会抑制PCR。
二、设置PCR反应(40μL体系)
3.对N+2个样品,在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照,故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:
| 成分 | N+2个样品管 | 阴性对照 | 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各20μL | 20μL | 20μL |
| HTLV前病毒通用PCR引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
| N+2个样品DNA模板 | 各18μL | - | - |
| PCR阴性对照(水) | - | 18μL | - |
| HTLV前病毒通用PCR阳性对照(10000倍稀释液) | - | - | 18μL |
4.按下表设置PCR反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5min |
PCR反应 (35个循环) | 95℃ | 15sec |
| 60℃ | 60sec |
| 72℃ | 30sec |
| 最后延伸 | 72℃ | 10min |
三、电泳检测5.取10~20μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为237bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。