碱性磷酸酶催化DNA，RNA和核苷酸释放5'-和3'-磷酸基团，该酶还可去除蛋白中的磷酸基团。
产品特点：1．重组酶
2．快速去磷酸化
3．快速失活
4．载体DNA的同时酶切和去磷酸化
产品应用：● 克隆载体DNA的脱磷酸化，以防止连接过程中的再循环；
● 载体DNA同时消化和去磷酸化；
● 在PCR产物测序之前的核苷酸降解；
● 在用T4多核苷酸激酶标记前，核酸5'-端的脱磷酸化；
● 其他DNA和RNA底物去磷酸化的应用；
● 蛋白质去磷酸化。
酶活定义： 一个酶活单位是在37℃，pH8.0，AP Buffer中每分钟催化1 μmol磷酸对硝基苯酯水解的量。
产品来源： 携带编码细菌AP基因质粒的大肠杆菌。
产品组成：| 组分 | 50U | 200U | 1000U |
| 热敏型碱性磷酸酶(0.2U/μL) | 250μL | 1mL | 5×1mL |
| 10×AP Buffer | 500μL | 1mL | 5mL |
保存：-20℃
保存溶液： 25mM Tris-HCl(pH8.0)，1mM MgCl
2，0.1mM ZnCl2，0.1% Triton X-100和50%甘油。
缓冲体系： 10×AP Buffer： 500mM Tris-HCl(pH8.0@37℃)，100mM MgCl
2，0.1mM ZnCl2，100mM KCl。
酶抑制剂： 金属螯合剂
酶热失活： 在75℃下加热5分钟失活。
质量控制：● 内切核糖核酸酶分析
10U AP与1μg pUC19 DNA在37℃下孵育4h后，未检测出共价闭合的环状DNA转化为有切口的DNA。
● 核糖核酸酶分析
10U AP与1μg 16S，23S rRNA在37℃孵育4h后，未检测出污染的RNA酶活性。
使用方法：1．
质粒载体线性化与去磷酸化同步反应流程a．于冰上配制如下反应体系：
| 成分 | 用量 |
| 质粒DNA | 1μg |
| 10×酶切Buffer | 5μL |
| 限制性内切酶 | 1μL |
| 碱性磷酸酶 | 5μL(1U) |
| ddH2O | 至50μL |
为了保证去磷酸化的效率，质粒DNA应不含RNA和基因组DNA污染。
b．充分混匀并瞬离，37℃温育10～30min。
注：如果延长温育时间，可能产生星号活性。
c．80℃温育20min，以终止反应。
2．
核苷酸去磷酸化的实验流程 该方案适用于去除DNA的3'和5'端磷酸基团。
a．于冰上配制如下反应体系：
| 成分 | 用量 |
| 线性DNA | 1μg |
| 10×AP Buffer | 5μL |
| 碱性磷酸酶 | 5μL(1U) |
| ddH2O | 至50μL |
b．充分混匀并瞬离，37℃温育10min。
c．75℃温育5min，以终止反应。
3．
蛋白质去磷酸基团的实验流程a．于冰上配制如下反应体系：
| 成分 | 用量 |
| 10×AP Buffer | 5μL |
| 磷酸化蛋白质 | 2～4μg |
| 碱性磷酸酶 | 10μL(2U) |
| dd H2O | 至50μL |
b．充分混匀并瞬离，37℃温育1h；
c．添加EDTA至50mM的终浓度，或添加钒酸钠(Na3VO4)至10mM的终浓度，以终止反应。
